Transfection of homopyrimidine third strand binding probes into human cells and their specific binding to chromosomal targets
İnsan hücresindeki spesifik kromozomlara homopürimidin üçüncü bağ probunun transfer edilmesi ve bağlanması
- Tez No: 216520
- Danışmanlar: PROF.DR. JACQUES ROBERT FRESCO, Y.DOÇ.DR. MUSTAFA FATİH ABASIYANIK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biyoloji, Moleküler Tıp, Biochemistry, Biology, Molecular Medicine
- Anahtar Kelimeler: Triple Forming Oligonucleotides, transfection, sickle cell anemia, chromosome, modified oligonucleotides, Triple Forming Oligonucleotides, transfection, sickle cell anemia, chromosome, modified oligonucleotides
- Yıl: 2006
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Fatih Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 36
Özet
nsan genomundaki belirli bölgelerinde meydana gelen nokta mutasyonların tamirini hedef alan reaktif ajanların spesifik mutasyon bölgelerine balanmasında homopürimidin dizisinin kullanımını ve bu dizilerin insan HeLa ve K562 hücrelerine transfer edilmesine yönelik metod gelitirilmesi. Orak hücreli anemiye neden olan globin genindeki nokta mutasyonunun düzeltilmesini amaçlayan metodun gelitirlmesine yönelik uzun süreçli çalımanın bir parçasıdır. 20-40 nükleotid uzunluunda ve tek dizin olan deoxyoligonükleotidin plazmid olmadan ve viral vektörsüz olarak hücre içerisine transfer edilmesindeki temel amaç gen mutasyonlarının düzeltilmesidir. Bu deoxtoligonükleotidi hücre içerisine transfer etmek için toksik olmayan transfer ajanları kullanılmıtır. Bu küçük gene parçalarını hücre içersinde görüntülemek için dizinler FITC ve TMR ile iaretlenmitir.5' uzunda psoralen, 3' ucunda FITC veya TMR taıyan probe dizini hücre içerisine transfer edildi ve çekirdek içerisine hızlı girii gözlemlendi. 23 saat sonra hücre bölünmesini metafaz aamasında durdurmak için colchicine eklendi. Hücre içerisine transfer edilen probların kovalent ba oluturabilmesi için UVA ııa maruz bırakıldı. Hücrelerin hipotonik solisyon ile patlasınından sonra kromozomları lam üzene yayıldı ve Konfokal mikroskop ile incelendi. 11. ve 17. krozomların sentromerik bölgelerine, globilin, Her2/nue ve topo II gen bölgelerine spesifik probların kullanılmıtır. Yüksek spesifik özellie sahip bu probların doru gen bölgelerine balandıkları gözlemlenmitir. Buna ek olarak transfer kinetii ve transfer oranı FACS ile belirlenöitir.
Özet (Çeviri)
To utilize homopyrimidine strands as highly specific third strand binding agents for delivery of reactive reagents to modify mutant target residues at unique sites in the human genome, we have explored methods for transfecting such short deoxyoligomers into HeLa and K562 cells, and then demonstrated that those strands do, in fact, bind to the correct target sequences. This work is part of a long term effort to develop a general method for correcting point mutations responsible for human diseases that is presently focused on the b-globin gene mutation that causes Sickle Cell Anemia. While transfection of linear duplex and plasmid DNA into human cells is a well-established procedure, this is not the case for single deoxyoligonucleotide strands 20-40 residues long (and without added carrier plasmid or viral vector), as we require for gene mutation correction. After exploring a variety of transfection reagents, one was found that is effective at non-toxic levels. To monitor their entry into cells, the strands were labeled with the fluors FITC or TMR. Probe strands with 5? psoralen and 3? FITC or TMR vi termini were transfected into cells, and were observed to enter nuclei rapidly. After 23 hours, colchicine was added to halt cell progression in metaphase; an hour later the cells received a pulse of UVA light to covalently link the probes wherever they might be bound. After bursting the cells in hypotonic solution, their chromosomes were spread on glass slides and examined by confocal microscopy. Using probes specific to centromeric sequences of chromosomes 11 and 17, and probes to the b-globin gene in chr #11 and the Her2/neu and Topo2 genes, both in chr #17, highly specific probe binding to the correct chromosome centromeric and arm regions was observed. In addition, transfection kinetics and efficiency were determined using fluorescence activated cell sorting (FACS).
Benzer Tezler
- Transgenik embryo üretimi için koç spermatozoonlarının farklı yöntemlerle transfekte edilmesi
Transfection of ram spermatozoa using different techniques for generating transgenic embryos
GÜL BAKIRER ÖZTÜRK
Doktora
Türkçe
2013
Biyoteknolojiİstanbul ÜniversitesiDölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SERHAT PABUCCUOĞLU
- HeLa kanser hücrelerini etiketlemek amacı ile lipid bazlı nanopartikül ile transfeksiyonu
Transfection of HeLa cancer cell line for labelling via lipid-based nanoparticles
FATMA CEREN KIRMIZITAŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Bilim ve TeknolojiYıldız Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NELİSA TÜRKOĞLU
DOÇ. DR. MURAT DEMİRBİLEK
- Klonlama ile transgenik koyun üretiminde donör hücrelerin nanopartiküller kullanılarak transfeksiyonu, Roscovitine ve Trichostati-A ile yeniden programlanması
Transfection of donor cells using nanoparticles and reprogramming with Roscovitine and Trichostatin A for the production of transgenic sheep by cloning
SELİN YAĞCIOĞLU
Doktora
Türkçe
2021
Biyoteknolojiİstanbul Üniversitesi-CerrahpaşaDölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SERHAT PABUCCUOĞLU
- Transfection of streptococcus thermophilus by electroporation to improve yogurt culture
Başlık çevirisi yok
ESRA TÜZÜN(DİKER)
- Lökomogenezde ifadesi azalmış miRNA' ların polietilen glikol - polietilenimin nanopartikülü aracılı lösemi hücrelerine non-viral transfeksiyonu ile lösemi modellerinde mikrodizin transkriptom analizi
Microarray based transcriptome analysis of leukemia cell models via polyethylene glycol - polyethylenimine nano-particle mediated non-viral transfection of miRNAs into leukemia cells which are down regulated in leukemogenesis
TUĞÇE BALCI
