High-level expression of hepatitis B surface antigen in Pichia pastoris, its purification and immunological characterization
Hepatit B yüzey antijeninin Pichia pastoris'de yüksek miktarda expresyonu, saflaştırılması ve immunolojik karakterizasyonu
- Tez No: 255339
- Danışmanlar: PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ, PROF. DR. H. AVNİ ÖKTEM
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2009
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 90
Özet
Hepadnaviridae ailesine bağlı olan Hepatit B virüsü, akut ve kronik hepatit hastalığına neden olmaktadır. Bu enfeksiyona karşı geliştirilen aşılar 1982 yılından beri kullanılmasına rağmen, pahalı olması ve fakir ülkelerde yaygın olarak kullanılamaması nedeniyle HBV hala dünya çapında önemli bir sağlık problemi olmayı sürdürmektedir. 2 milyar hepatit B taşıyıcısının 350 milyondan fazlası, yüksek siroz ve karaciğer kanseri riski taşıyan kronik hastalardır. Günümüzde kullanılan hepatit aşıları, viral yüzey antijenlerinden oluşan recombinant alt ünite aşılardır (S proteini).Bu çalışmada Hepatit B yüzey Antijeninin (rHBsAj) metilotrofik bir maya olan Pichia pastoris'de yüksek miktarda ekspresyonu gerçekleştirilmiştir. Bu amaçta HBV M geni tek kopya olarak alkol oksidaz (AOX1) promotorunun altına yerleştirilerek pPICZA vektörüne klonlanmıştır. Klonlama çalışmalarından sonra rHBsAj protein sentezi hücre içinde metanolle indüklenmiştir. Yüksek hücre konsantrasyonlu fermentasyon çalışmalarının ardından, rHBsAj kromatografik teknikler kullanılarak saflaştırılmıştır. Rekombinant HBsAj proteini ile bağışıklanan farelerde oluşan immun yanıt ticari Hepatit B yüzey antijen kiti kullanılarak gösterilmiştir. Üretilen rekombinant antijenin istenilen konformasyonda olduğu AFM (Atomic Force Microscopy) mikroskopu ile doğrulanmıştır.
Özet (Çeviri)
Hepatitis B virus (HBV), which belongs to the family Hepadnaviridae, is responsible for acute and chronic hepatitis. The vaccines presently used to immunize patients against HBV are recombinant subunit vaccines consisting of viral surface antigens (S protein). However, they are expensive and their use is limited in poor countries. For that reason, HBV remains an important worldwide health problem. Of the 2 billion people who have been infected with the HBV, more than 350 million have chronic (lifelong) infections, who face increased risk of developing cirrhosis and hepatocellular carcinoma.In this study, high-level expression of recombinant Hepatitis B surface Antigen (rHBsAg), PreS2-S was achieved in the methylotrophic yeast, Pichia pastoris. For this aim, a single copy of HBV M gene (PreS2-S) was inserted at the downstream of the alcohol oxidase (AOX1) promoter of the pPICZA vector. rHBsAg protein could then be expressed intracellularly by induction with methanol. High cell density fermentation was followed by chromatographic separation to obtain pure rHBsAg. Humoral response after immunization with the purified protein was observed in mice using commercial Hepatitis B surface antigen kits. It was verified by the atomic force microscopy that rHBsAg has been produced in the desired conformation.
Benzer Tezler
- Kronik B ve C hepatitinde T lenfosit yüzey markırları ve Th1/Th2 sitokin dengesi
T lymphocyte surface markers and Th1/Th2 cytokine equilibrium in chronic hepatitis B and C
SUZAN ADIN ÇINAR
Doktora
Türkçe
2002
Allerji ve İmmünolojiİstanbul Üniversitesiİmmünoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. SELİM BADUR
- Inhibition of HBsAg with stable transfection of Anti-HBsAg recombinant antibody in PLC/PRF/5 cell line
Anti-HBsAg rekombinant antikorunun stabil transfeksiyonu ile PLC/PRF/5 hücre hattinda HBsAg'nin inhibisyonu
ELİF AKTAR
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
GenetikGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TAMER YAĞCI
DR. AYLİN ÖZDEMİR BAHADIR
- Hepatit c virüs (HCV) enfeksiyonlarında kemokinlerin rolü
The role of chemokines in hepatitis c virus (HCV) infection
ORÇUN ZORBOZAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2013
MikrobiyolojiPamukkale ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İLKNUR KALELİ
- Hepatit B hastalarında klinik ile interferon yolağı genlerinin ilişkisinin değerlendirilmesi
Assessment of the relationship between clinical condition and interferon pathway genes in Hepatitis B patients
ÇİSEM ÇINAR
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2024
Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyolojiİstanbul Üniversitesi-CerrahpaşaTıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ESRA ARSLAN ATEŞ
- Nesfatin-1 ile çölyak hastalığı arasındaki ilişkinin değerlendirilmesi
Evaluation of the relationship between Nesfatin-1 and celiac disease
ASLI OKU SELEK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2022
GastroenterolojiBolu Abant İzzet Baysal Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GÜRAY CAN
DOÇ. DR. MÜJGAN GÜRLER