Malacosoma neustria orjinli Bacillus thuringiensis'e ait cry2Ab geninin karakterizasyonu, ekspresyonu ve insektisidal aktivitesinin araştırılması
Characterization, expression and investigation of the insecticidal activities of cry2Ab gene which belongs to Bacillus thuringiensis bacteria origin malacosoma neustria
- Tez No: 259862
- Danışmanlar: DOÇ. DR. İSMAİL DEMİR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2010
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 101
Özet
Bacillus thuringiensis, Gram-pozitif, sporlanabilen, fakültatif anaerop bir toprak bakterisidir. Sporlanma esnasında üretilen, parasporal kristal yapıdaki ?-endotoksinler, bunların çok sayıda tarım zararlılarıyla mücadelede etkili ve yaygın bir şekilde kullanılmalarını sağlamaktadır. Bu potansiyelleri nedeniyle bugün, tüm dünyada en çok üretilen ve en fazla market satışlarına sahip ticari mikrobiyal mücadele preparatları B. thuringiensis'lerden geliştirilmiştir.Bu çalışmada kullanılan Bacillus thuringiensis MnD izolatı, doğal olarak ölmüş Malacosoma neustria larvalarından izole edildi. Bu izolata ait cry2Ab geni, dejenerat primerler kullanılarak PZR yöntemiyle çoğaltıldı. Çoğaltılan genlerin nükleotid sıralarının belirlenmesi için PZR ürünleri pGEM-T Easy vektörüne klonlandı ve dizin analizine gönderildi. Dizin analizi yapılan cry2Ab geninin DNA ve aminoasit sıraları literatürdeki mevcut cry2Ab genlerinin DNA ve aminoasit sıraları ile karşılaştırıldı.Analiz sonuçları, çalışmada kullanılan yerel Bacillus thuringiensis izolatına ait cry2Ab geninin 1902 bp uzunluğunda olduğunu, 633 aminoasit dizisi kodladığını ve literatürdeki B. thuringiensis ly30 bakterisinin cry2Ab genine %99 oranında benzerlik gösterdiğini ortaya koydu. Dizin analizi yapılan bu cry2Ab geni, pET-28a(+) ekspresyon vektörüne klonlanarak Escherichia coli'de ekspres edildi. Ekspresyon sonucu, SDS-PAGE analizine tabi tutuldu ve cry2Ab proteininin 70 kDa büyüklüğünde olduğu belirlendi. Üretimi yapılan cry2Ab proteinin insektisidal aktivitesi, Malacosoma neustria (Lepidoptera: Lasiocampidae) ve Rhagoletis cerasi L. (Diptera: Tephritidae) zararlıları üzerinde test edildi. Yüz ?g konsantrasyonundaki cry2Ab proteinin M. neustria larvaları üzerinde %73 ve R. cerasi larvalarında ise %75'lik insektisidal etki gösterdiği belirlendi.
Özet (Çeviri)
Bacillus thuringiensis is a gram-positive, facultative anaerob soil bacterium can be sporulated. During sporulation, it produces different ?-endotoxins that have a parasporal crystal structure because of the B. thuringiensis, an important insect pathogen, is effectively and widely used in combating pests. Because of their potential, B. thuringiensis is the most produced and most marketed commercial microbial control preparate around the world today.B. thuringiensis MnD isolate used in this study was isolated from a naturally dead M. neustria larvae. cry2Ab gene belonging to that isolate was amplified with the PCR method by using degenerate primers. The amplified gene was cloned to pGEM-T Easy Vector and its sequence analysis was performed in order to identify the nucleotide sequence. DNA and aminoacid sequence of cry2Ab gene that underwent a sequence analysis, was compared with the DNA and aminoacid sequences of existent cry2Ab gene in literature.The results of anaysis show that cry2Ab gene belonging to the local B. thuringiensis isolates used in this study has a length of 1902 bp and 633 aminoacid sequence. Besides, it has %99 homology with the cry2Ab gene of B. thuringiensis ly30 bacterium in literature. The sequenced cry2Ab gene was cloned to the pET-28a(+) expression vector and their proteins were expressed in Escherichia coli. The result was exposed to SDS-PAGE analysis and it was found that cry2Ab protein had the size of 70 kDa. The insecticidal activity of the cry2Ab protein produced was tested on Malacosoma neustria L. (Diptera: Lasiocampidae) and Rhagoletis cerasi L. (Diptera: Tephritidae). It was found that cry2Ab protein in 100 ?g concentration showed 73% insecticidal effect on M. neustria larvae and 75% insecticidal effect on R. cerasi larvae.
Benzer Tezler
- Malacosoma neustria (Lepidoptera:Lasiocampidae)'dan virüs izolasyonu, karakterizasyonu ve mikrobiyal mücadelede kullanılma potansiyeli
Isolation and characterization of virus from Malacosoma neustria (Lepidoptera:Lasiocampidae) and its potential use in microbial control
MUSTAFA YAMAN
Doktora
Türkçe
2003
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZİHNİ DEMİRBAĞ
- Malacosoma neustria nükleopolihedrovirüs (ManeNPV-T2)'ün genom organizasyonu ve AC145 proteinlerinin oral enfektivite proteinleriyle etkileşimleri
Genome organization of Malacosoma neustria nucleopolyhedrovirus (ManeNPV-T2) and interactions of AC145 proteins with oral infectivity proteins
DÖNÜŞ GENÇER
- Malacosoma neustria nükleopolihedrovirüs (ManeNPV)'ün malacosoma disstria hücre kültüründe in vitro replikasyonu ve konak spektrumunun araştırılması
Replication of Malacosoma neustria nucleopolyhedrovirus in malacosoma disstria cell line and investigation of the host range
NURTEN GÜREL
Yüksek Lisans
Türkçe
2008
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. İSMAİL DEMİR
- Malacosoma neustria L. (Lepidoptera: Lasiocampidae) 'nın besin seçimi ve gelişmesine etki eden kimyasal faktörlerin geometrik analizlerle belirlenmesi
The determination of the chemical factors effecting on the food choice and the development of Malacosoma neustria L. (Lepidoptera: Lasiocampidae) by geometric analyses
NURVER ALTUN
- Malacosoma neustria (L.) (Lepidoptera: Lasiocampidae) larvalarının barsak dokusunda kadmiyum'un etkisiyle oluşan değişikliklerin ışık mikroskobu düzeyinde araştırılması
Investigation of changes caused by cadmium in gut of Malacosoma neustria (Lepidoptera: Lasiocampidae) larvae at the light microscope level
AYŞE TAŞKIN
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyolojiOndokuz Mayıs ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ BANU EREN