Serotonin reseptörü ve SERCA genlerinin A7r5 Vasküler Düz Kas Hücre kültürlerindeki ayrımsal ekspresyon kalıplarının işlevsel sonuçları.
Functional consequences of differential expression patterns of serotonin and SERCA genes in A7r5 vascular smooth muscle cell lines.
- Tez No: 260135
- Danışmanlar: DOÇ. DR. METİNER TOSUN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Eczacılık ve Farmakoloji, Pharmacy and Pharmacology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2009
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Farmakoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 76
Özet
In vitro farmakolojik ve fizyolojik çalışmalarda vasküler düz kas hücre modeli olarak A7r5 (embriyonik sıçan torasik aort düz kas hücre hattı) 10-25. pasajlar arasında sıklıkla kullanılmaktadır. Ancak, primer hücre kültürlerinden farklı olarak, ölümsüzleştirilen bu hücrelerde gen ekspresyonunda dramatik nicel ve nitel değişiklikler gözlenmektedir. Bu nedenle çalışmamızda yapısal proteinlere oranla oldukça düşük düzeyde olan 5-HT2A ve SERCA2b gen ekspresyonlarını ve bunlarla ilişkili olası reseptör-aracılı/ reseptörden bağımsız hücre içi Ca+2 dinamiklerindeki değişimler belirlenerek laboratuvarımızda kullanılan bu modelin validasyonu amaçlanmıştır.Hücre kültür ortamında erken (pasaj no: 14-16) ve ileri (pasaj no: 23-24) pasajlara ait hücrelerde ekspresyon analizleri ve hücre içi Ca+2 ölçümleri yapılmıştır. A7r5 (ECACC) hücreleri besi ortamı (DMEM/Ham's F-12) ile kültüre edilmiştir. Her iki gruba ait hücrelerden elde edilen total RNA'lardan ters transkriptaz reaksiyonu ile cDNA oluşturulmuştur. 5-HT ve SERCA2b mRNA düzeyleri kantitatif Real Time PCR ile belirlenmiştir. Serotoninin neden olduğu reseptör aracılı hücre içi Ca+2 konsantrasyonundaki artış ve selektif SERCA inhibitörü siklopiazonik asit (CPA) ile aktive edilen depo-kontrollü Ca+2 girişi (SOCE) Ca+2 belirteci fura-2/AM yüklenmiş hücrelerde yüzeyel spektrofluorometri yöntemi ile gerçek zamanlı olarak belirlenmiştir.Kantitatif Real time PCR sonuçlarına göre 5-HT2A mRNA düzeyinde anlamlı bir değişiklik olmazken, SERCA2b geninin ekspresyonu ileri pasajlarda erken pasajlara göre belirgin olarak artmıştır (P
Özet (Çeviri)
Embryonic rat aortic smooth muscle cell line, A7r5, is indiscriminately used between 10th and 25th passages as vascular smooth muscle cell model in pharmacological and physiological studies. Unlike freshly dispersed primary cells, immortalized cells including A7r5s have been reported to have quantitative and qualitative changes after 25th passages. For this reason, we investigated 5-HT2A and SERCA2b gene expressions as well as possible associated changes in receptor-dependent and/or -independent cytoplasmic Ca2+ dynamics in A7r5s in which we routinely used for post-transcriptional gene silencing of candidate genes coding for novel Ca2+ channels.Expressional changes as well as cytoplasmic Ca2+ levels in cells at early (p#14.-16.) and late (p#23.-24.) passages were performed. A7r5 (EACC) cell?s medium was cultured by DMEM/Ham?s F-12. Complementary DNAs were synthesized by reverse transcriptase reaction for total RNAs isolated from both cell groups.and 5-HT2A and SERCA mRNA levels were determined by quantitative Real Time PCR. Serotonin receptor-mediated elevations in cytosolic Ca+2 concentration and the receptor-independent store operated Ca+2 entry activated by the selective SERCA blocker the CPA, were monitored via a front face spectrofluorometric method in Ca+2 ?specific dye fura-2-loaded cells.On the basis of real time PCR results, no significant change was observed in 5-HT2A mRNA levels, however, SERCA2b mRNA expression increased in late passages compared to that of earlier passages (P
Benzer Tezler
- Vasküler SERCA inhibisyonunun serotonin yanıtlarındaki işlevi: Sekresyon-tipi kenetlenmeye bir kanıt
The role of vaskular SERCA inhibition on serotonin responses: An evidence for 'secretion-like' coupling
ÇİĞDEM SELLİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2005
Eczacılık ve FarmakolojiEge ÜniversitesiFarmakoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. METİNER TOSUN
- Seçici serotonin gerialım inhibitörü kullanımına bağlı cinsel işlevlerde bozulma gelişen ve gelişmeyen hastalar ile sağlıklı gönüllülerin melanokortin-4 reseptörü ve α - melanosit stimüle hormon düzeylerinin karşılaştırılması
Comparison of melanocortin-4 receptor and α - melanocyte stimulated hormone levels of healthy volunteers with patients who developed and did not develop impaired sexual function due to the use of selective serotonin reuptake inhibitor
SİMGE NUR KURT KAYA
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2023
PsikiyatriSağlık BakanlığıRuh Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. YASİR ŞAFAK
- Erken boşalma etiyolojisinde gen polimorfizmleri
Gene polymorphisms in premature ejaculation etiology
MELİS DANIŞMAN SONKURT
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2019
GenetikEskişehir Osmangazi ÜniversitesiRuh Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. GÜLCAN GÜLEÇ
- The association of HTR2A gene polymorphism wıth autism in Jordanian population
Ürdün nüfusunda HTR2A gen polimorfizmin otizm ile ilişkisi
ZEYAD MAHMOOD
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
Sağlık EğitimiBahçeşehir ÜniversitesiSinir Bilimi Ana Bilim Dalı
ASSOC. DR. FATİH ÖZDENER
- Palonosetronun kanserli hastalarda EKG parametreleri üzerinde akut dönemde etkileri
Acute effects of palonosetron on ECG parameters in cancer patients
CENGİZ AKOSMAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2010
OnkolojiYeditepe Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BAŞAK OYAN ULUÇ