Van gölü balığı karaciğeri 6-fosfoglukonat dehidrogenazın (EC1.1.1.44; 6PGD ) afinite kromatografisi ile saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification, characterization of 6-phosphogluconate dehydrogenase (EC 1.1.1.44; 6PGD) from lake Van fish liver by affinity chromatography
- Tez No: 269182
- Danışmanlar: DOÇ. DR. VEDAT TÜRKOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Kimya, Biochemistry, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2010
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Yüzüncü Yıl Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 70
Özet
Bu çalışmada Van Gölü balığı karaciğeri 6-fosfoglukonat dehidrogenaz (EC 1.1.1.44; 6PGD) enzimi afinite kromatografisi metoduyla saflaştırıldı. Bu çalışmada önce balık karaciğeri uygun bir şekilde alınarak homojenat hazırlandı. Hazırlanan homojenat dengeleme tamponu ile dengelenen afinite kolonuna tatbik edildi. Kolon, absorbans değeri 0,01 nm'den küçük olana kadar yıkama tamponu ile yıkandı. Son olarak kolona elüsyon tamponu tatbik edilerek ayrılan enzim fraksiyonları elüsyonlar halinde alındı. Her bir elüsyonun 280 nm'de kalitatif protein tayinleri, 595 nm'de kantitatif protein tayinleri ve 340 nm'de aktivite tayinleri yapıldı. Enzimin saflığını kontrol etmek için Sodyumdodesilsülfat poliakrilamid jel elektroforez (SDS-PAGE) metodu kullanıldı. Elektroforez jelinin fotoğrafı çekildi ve tek protein bandı görüldü. Saflaştırma oranı 446.5-kat olarak hesaplandı. SDS-PAGE ile enzimin alt biriminin molekül ağırlığı 57 kDa olarak belirlendi. Enzimin optimum sıcaklığı ve optimum pH'si sırasıyla 35-40 OC, 8-9 aralığında bulundu. İyonik şiddet etkisinin araştırıldığı bu çalışmada enzimin maksimum aktivite gösterdiği tuz [(NH4)2SO4] konsantrasyonu 0.02 M olarak bulundu.
Özet (Çeviri)
In this study 6-phosphogluconate dehydrogenase (EC 1.1.1.44; 6PGD) was purified from Lake Van fish liver by means of affinity chromatography method. In the study at fırst fish liver was properly removed and homogenate was prepared. The homogenate was loaded onto the affinity column which was equilibrated with equilibration buffer. The column was washed with washing buffer until the absorbance value droped below 0.01 nm. Finally the elution buffer was loaded onto the column and the separated fractions of enzyme were taken as elutions. Each of the elutions was done qualitative protein determination at 280 nm, quantitative protein determination at 595 nm and activity assays at 340 nm. To check the purity of the enzyme SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) was used. The photo of the electrophoresis was taken and seen one protein band. The purification rate was calculated to be 446.5-fold. The molecular mass of the subunit was estimated to be 57000 Da by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. Optimal temperature and optimal pH of the enzyme were determined between 35-40 oC and 8-9 respectively. This study which effect of ionic strenght was searched in the enzyme shown optimal activity in 0.02 M salt [(NH4)2SO4].
Benzer Tezler
- Van Gölü balığı (Chalcalburnus tarichi P.1811) karaciğeri ve beyin homojenatındaki asetilkolinesteraz (EC.3.1.1.7) enzimi üzerine bazı bitki ekstraktlarının in vitro etkilerinin araştırılması
The research of in vitro effects of certain plant extracts on acetylcholinesterase (EC 3.1.1.7) enzyme in homogenate of the liver and brain of lake Van fish
ZEHRA BAŞI
- Van gölü balığından (Chalcalburnus tarichi, p-1811) glutatyon redüktaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı ilaç ve kimyasal maddelerin etkilerinin araştırılması
Purification and characterization of glutathione reductase from Van Lake fish (Chalcalburnus tarichi, p-1811) and investigation of effects of some drugs and chemicals on this enzyme
MUHAMMED ALTUN
- Van Gölü balığının (Chalcalburnus tarichi P. 1811) karaciğerinden ve eritrositlerinden glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enziminin (E.C. 1.1.1.49) afinite kromatografisi ile saflaştırılması ve karakterizasyonu
The purification and characterization of glucose-6-phosphate dehidrogenase (E.C. 1.1.1.49) enzyme with affinity chromatography from Van Lake fish (Chalcalburnus tarichi P. 1811)
MUHAMMED ALTUN
- Van Gölü balığı ,İnci kefalinde (Chalcalburnus tarichi, pallas, 1811) Vitamin A'nın yüksek perfomanslı sıvı kromatografisi ile tayini
Determination of vitamin A in the lake fish, İnci kefali (Chalcalburnus tarichi, Pallas, 1811), by high performance liquid chromatography
İBRAHİM HAKKI YÖRÜK
- Van Gölü'nde yaşayan İnci kefali (Chalcalburnus tarichi, pallas, 1811) balığı'ndaki vitamin E miktarlarının yüksek performanslı sıvı kromataografisi (HPLC) ile tayini
Determination of vitamin E in the Van Lake fish, İnci kefali (Chalcalburnus tarichi, pallas, 1811) by high performance liquid chromatography
ARZU AKYÜZ
