Bacillus subtilis M33'den hücre dışı alkali proteaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of an extracellular alkaline protease from Bacillus subtilis M33
- Tez No: 312669
- Danışmanlar: DOÇ. DR. ELİF LOĞOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2011
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gazi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 113
Özet
Alkali proteazlar, endüstrinin hemen her alanında kullanılmakta ve çok çeşitli kaynaklardan farklı metotlarla saflaştırılması gerçekleştirilmektedir. Bu çalışmada, topraktan izole edilen yeni bir B.subtilis M33'den hücre dışı alkali proteaz üretimi 37°C'de, 180 rpm çalkalama hızında 24-26 saat süresince gerçekleştirildi. Proteaz enzimi, %35-80 amonyum sülfat çöktürmesi ve DEAE selüloz anyon değişim kromatografisiyle %38,66 verimle ham homojenata göre 15,50 kat saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimin molekül kütlesi sodyum dodesilsülfat poliakrilamit jel elektroforezi (SDS PAGE) ve jel filtrasyon kromatografisi ile yaklaşık 39 kDa olarak tayin edildi. Saflaştırılan proteaz enziminin optimum pH ve sıcaklığı sırasıyla 10,0 ve 55°C olarak bulundu. Enzimin 1 hafta boyunca pH 8,0-11,0 aralığında kararlılığını koruduğu görüldü. Enzimin fenilmetilsülfonilflorür gibi spesifik proteaz inhibitörüyle tamamen inhibe olduğu, etilen diamin tetra asetik asit inhibitöründen etkilenmediği, 2-merkapto etanol ve ditiyoteritol varlığında aktivitesinin arttığı dolayısıyla tiyol bağımlı serin proteaz olduğu belirlendi. Proteaz enziminin Mn2+, Mg2+ gibi metal iyonlarıyla aktive olduğu, Fe3+ ile aktivitesini kısmen kaybettiği görüldü. Enzimin oksidantlar (H2O2), yüzey aktif maddeleri (SDS, Triton X-100, Tween-80) ile ve ayrıca dimetil sulfoksit , etanol, aseton, benzen, n-Butanol, heptan, oktanol, toluen, metanol, asetonitril, 2-propanol gibi organik çözücülerle kararlılığını koruduğu tespit edildi. Enzimin çeşitli endüstriyel deterjanlar varlığında da aktivitesi incelendi. Proteaz enziminin, kazein, sığır serum albumini, ovalbumin gibi doğal substratlara olan spesifitesi incelendi. Saflaştırılan enzimin Km ve Vmak kinetik parametreleri kazein substratı kullanılarak sırasıyla 0,706 mg/ml, 3000 µM.min-1 bulundu.
Özet (Çeviri)
Alkaline proteases are important from an industrial perspective due to their wide scale applications and can be obtained from different sources. In this study, protease was produced at 37°C for 24-26 hours in a shaker incubator (180 rpm). An alkaline protease from a newly isolated Bacillus subtilis M33 was purified by (%35-80) ammonium sulfate precipitation and DEAE cellulose anion exchange chromatography with %38,66 yield and 15,50 fold. The molecular mass of purified enzyme was determined approximately 39 kDa by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS PAGE) and gel filtration chromatography. The enzyme exhibited pH and temperature optima of 10.0 and 55°C respectively, and was stable between a wide pH range of 8.0 and 11.0 for 7 days. Some spesific protease inhibitors such as phenylmethyl sulfonyl fluoride completely inhibited the enzyme activity, whereas, ethylenediaminetetraacetic acid did not effect the enzyme activity. However, the protease activity was increased in the presence of 2-mercaptoethanol and dithiothreitol, suggesting it to be a thiol-dependent serine protease. Mn2+ and Mg2+ ions increased the enzyme activity, Fe3+ slightly decreased protease activity. The enzyme was also stable towards laboratory bleaches (H2O2), surfactants (Tween 80, Triton X-100, SDS) and organic solvents such as benzene, toluene, acetone. The substrate specifity of purified protease was tested for the substrates such as casein, bovine serum albumin and egg albumin. Also, different commercially avaliable detergents were used to study the compatibility of the purified alkaline protease. The kinetic parameters Km and Vmax of the purified protease were determined by measuring the protease activity casein as a substrate 0.706 mg/ml, 3000 µM.min-1 respectively.
Benzer Tezler
- Bacillus subtilis'te oluşturulan yapay mutasyonların metabolik hastalıkların teşhisinde kullanılması yönünden değerlendirilmesi
Başlık çevirisi yok
NİMET YİĞİT
Yüksek Lisans
Türkçe
1994
GenetikAtatürk ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. İRFAN BATAT
- Investigation of the effects of abrb and cody deletions on the bacilysin overproducer B. subtilis HWA strain
AbrB ve CodY yokluğunun basilisin yüksek üreticisi B. subtilis HWA suşundaki etkilerinin incelenmesi
GÖKSU TARTAR
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYTEN KARATAŞ
- Değişik bacillus suşlarının enzim polimorfizmi bakımından karşılaştırılması ve gen aktarma imkanlarının araştırılması
Comparision of various bacillus strains in enzyme polymorphism and investigation of gene transfer possibilitirs
ADEM ALTINALAN
- Bacillus subtilis'te üreme plazmid ve amilaz sekresyonu üzerine kalsiyum kanal blokörlerinin ve ağır metallerin etkisi
The Effects of heavy metals and calcium chanal blockers on bacillus subtilis's growth, plasmid and amylase secretion
FİKRET UYAR
- Bacillus subtilis'ten antifungal ve antibakteriyal antibiyotiklerin üretimi ve etki spektrumlarının tespiti
Başlık çevirisi yok
MUSTAFA ERHAN YILDIZ
Yüksek Lisans
Türkçe
1997
BiyomühendislikEge ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SANVER EKMEKÇİ