Method development and validation to determine neurotransmitters by using hplc
Nörotransmitterlerin tayini için hplc'de metot geliştirilmesi ve metot validasyonu
- Tez No: 360527
- Danışmanlar: PROF. DR. SERPİL YENİSOY KARAKAŞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Nörotransmitter, GABA, Glutamat, Serotonin, Noradrenalin, Melatonin, Beyin omurilik sıvısı, Mikrodiyaliz, HPLC, Floresan Detektör, Metot Validasyonu, Belirsizlik Bütçesi, Neurotransmitter, GABA, Glutamate, Serotonin, Noradrenaline, Melatonin, Cerebrospinal Fluid, Microdialysis, HPLC, Fluorescence Detection, Method Validation, Uncertainty Budget
- Yıl: 2014
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Abant İzzet Baysal Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Bölümü
- Bilim Dalı: Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 143
Özet
Bu çalışmada, sıçan beyinlerinin hipokampüs, amigdala ve rafe çekirdeği bölgelerinden mikrodiyaliz yöntemi ile toplanan beyin omurilik sıvısı örneklerinde gama aminobütirik asit (GABA), glutamat, serotonin ve noradrenalin nörotransmitterleri ile melatonin hormonunun tayini için floresan dedektör, C18 ters-faz kolon ve yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) kullanılarak iki farklı metot geliştirilmiştir. Birinci metotta, GABA ve glutamatın birlikte tayini için siyanür iyonunun varlığında 2,3-naftalindikarboksialdehit (NDA) ile ön-kolon türevlendirme yapılmıştır. Türevler izokratik yıkama ile ayrılmış ve 420 nm uyarma ile 480 nm emisyon dalga boylarında floresan detektör ile tayin edilmişlerdir. İkinci metot türevlendirme basamağı olmaksızın melatonin, serotonin ve noradrenalinin birlikte tayinini içerir. Bileşikler izokratik yıkama ile ayrılmış ve 280 nm uyarma ile 340 nm emisyon dalga boylarında floresan detektör ile tayin edilmişlerdir. Metotların validasyonu yapılmıştır. Metotların performansı lineer aralık, algılama ve tespit limiti, geri kazanım ve kesinlik parametreleri ile değerlendirilmiştir. Kalibrasyon doğruları için standart ekleme metodu kullanılmıştır. Algılama limitleri GABA için 28 ppb, glutamat için 9 ppb, melatonin için 0,5 ppb, serotonin için 1,2 ppb ve noradrenalin için 2,7 ppb olarak bulunmuştur. Tespit limitleri ise GABA için 92 ppb, glutamat için 30 ppb, melatonin için 1,7 ppb, serotonin için 3,8 ppb ve noradrenalin için 8,8 ppb'dir. Ortalama geri kazanım değerleri GABA için % 103 ile % 118, glutamat için % 87 ile % 99, melatonin için % 88 ile % 121, serotonin için % 76 ile % 117 ve noradrenalin için % 72 ile % 105 arasında değişmektedir. Yüzde bağıl standart sapma (RSD) değerleri ise GABA için 0,78 ile 1,80, glutamat için 0,80 ile 1,67, melatonin için 0,31 ile 2,18, serotonin için 0,84 ile 5,05 ve noradrenalin için 0,44 ile 8,24 aralıklarında bulunmuştur. Tüm bileşikler için 'alttan-yukarı' yaklaşımı uygulanarak ölçüm belirsizlikleri hesaplanmıştır. Yüzde bağıl ölçüm belirsizlik değerleri 10,1 ile 16,7 aralığında değişim göstermiştir. Belirsizlik bütçesinin en büyük bileşenleri kalibrasyon eğrisi, stok çözelti ve geri kazanım olmuştur.
Özet (Çeviri)
In this study, two methods were developed for the determination of the neurotransmitters (gamma aminobutyric acid (GABA), glutamate, serotonin and noradrenaline) and the melatonin hormone in cerebrospinal fluid samples from the hippocampus, amygdala and raphe nuclei of the rat brain by using high-performance liquid chromatography (HPLC) with fluorescence detection and a C18 reversed-phase column. Samples were collected by using microdialysis technique. In the first method, pre-column derivatization with naphthalene-2,3-dicarboxaldehyde (NDA) in the presence of cyanide ion was performed for the simultaneous detection of GABA and glutamate. The derivatives were separated using isocratic elution and detected fluorimetrically at the excitation and the emission wavelengths of 420 and 480 nm, respectively. The second method involves the simultaneous detection of melatonin, serotonin and noradrenaline without derivatization step. The compounds were separated using isocratic elution and detected fluorimetrically at the excitation and the emission wavelengths of 280 and 340 nm, respectively. The methods were validated. The performance of the methods was evaluated in terms of linearity, method detection limit, limit of quantitation, recovery and precision. Standard addition method was used to obtain calibration curves. The method detection limit values were found as 28 ppb for GABA, 9 ppb for glutamate, 0.5 ppb for melatonin, 1.2 ppb for serotonin and 2.7 ppb for noradrenaline. The limit of quantitation values were found as 92 ppb for GABA, 30 ppb for glutamate, 1.7 ppb for melatonin, 3.8 ppb for serotonin and 8.8 ppb for noradrenaline. The average recoveries changed between 103 % and 118 % for GABA, 87 % and 99 % for glutamate, 88 % and 121 % for melatonin, 76 % and 117 % for serotonin and 72 % and 105 % for noradrenaline. The percentage relative standard deviation (RSD) values ranged from 0.78 to 1.80 for GABA, from 0.80 to 1.67 for glutamate, from 0.31 to 2.18 for melatonin, from 0.84 to 5.05 for serotonin and from 0.44 to 8.24 for noradrenaline. Measurement uncertainties of all compounds were calculated by applying 'bottom up' method. The calculated percentage relative uncertainty values for the compounds changed between 10.1 and 16.7. The major sources of the uncertainty budget were calibration curves, stock solution and recovery.
Benzer Tezler
- Düşük proteinli süt-bazlı fermente bir ürün geliştirilmesi
Development of milk-based fermented product with low protein content
SİNEM BETÜL CANİKLİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Gıda Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MERAL KILIÇ AKYILMAZ
- Cam ampullerde ve flakonlarda extractable ve leachable çalışmaları için yöntem geliştirme ve validasyon: Farmasötik preparata uygulama
Method development and validation for extractable and leachable studies in glass ampoules and vials: Application to pharmaceutical preparation
MUHAMMED HALİD MAVALDİ
- Gazlı içeceklerdeki gıda katkı maddelerinin uhplc ile eş zamanlı tayini için metot geliştirilmesi ve validasyon çalışmaları
Method development and validation studies for the simultaneously determination of the food additives in carbonated beverages by uhplc
MUHAMMED ZAHİD KASAPOĞLU
- Alerji ve kanser ilaçlarında bazı elementlerin ICP-MS ve ICP-OES ile analizi ve validasyonu
ICP-MS and ICP-OES analysis and validation of some trace elements in alergy and cancer drugs
ELİF KÖSE
- Oral yolla verilmek üzere probiyotik içeren taşıyıcı sistemin geliştirilmesi ve in vitro değerlendirilmesi
Development and in vitro evaluation of a carrier system containing probiotics for oral delivery
ÖMER FARUK KARACA
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Eczacılık ve FarmakolojiAnadolu ÜniversitesiFarmasötik Teknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLAY BÜYÜKKÖROĞLU