Mycobacterium tuberculosis ERP proteininin rekombinant olarak saflaştırılması ve bağışıklık yanıtın preklinik düzeyde incelenmesi
Purpose of Mycobacterium tuberculosis ERP protein as a recombinant and prevalence of an immunity response analysis
- Tez No: 482294
- Danışmanlar: DOÇ. DR. SEZER OKAY
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Moleküler Tıp, Tıbbi Biyoloji, Biology, Molecular Medicine, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Çankırı Karatekin Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 91
Özet
Günümüzde, tüberküloz hastalığına karşı kullanılan tek lisanslı aşı BCG aşısıdır. Bu aşının erişkinlerde koruyuculuğu yetersiz olduğu için etkin yeni tüberküloz aşılarının geliştirilmesi için çalışmalar başlatılmıştır. Bu tez çalışmasında ülkemizdeki bir verem hastasından izole edilmiş olan Mycobacterium tuberculosis suşundan erp geni çoğaltılarak önce pGEM-T sonra pET28-a vektörüne klonlandı. Daha sonra E. coli BL21 suşuna aktarıldı ve E. coli'de ifade edilen his-tag'lı rekombinant Erp proteini nikel kolonlar kullanılarak saflaştırıldı. Saflaştırılan protein yağ bazlı bir adjuvan olan Montanide ISA 720 VG ile 7:3 oranında karıştırılarak aşı formülasyonu hazırlandı. Rekombinant proteinin antijenik özellikleri Western blot deneyi ile kalitatif olarak analiz edildi. Rekombinant proteine ve BCG aşısına özgün serum kullanıldığında beklenen büyüklükte bantlar gözlenirken, sadece adjuvana özgün serum kullanıldığında bant gözlenmedi. Bununla birlikte Erp'nin hümoral ve hücresel bağışıklığı tetikleme kapasiteside değerlendirildi. Aşılama öncesi ve sonrası IgG değerleri karşılaştırıldığında, hazırlanan aşı formülasyonunun hümoral bağışıklık yanıtını anlamlı düzeyde uyardığı belirlendi. Bu formülasyonun hücresel bağışıklığı tetikleme kapasiteleri serum interferon-gama (IFN-γ) ve interlökin-12 (IL-12) düzeyleri ile ölçüldü. Erp formülasyonunun IFN-γ düzeyini artırmada BCG kadar etkin olduğu gözlendi ve 15. ve 30. günlerde BCG'den daha yüksek IL-12 düzeyi sağladığı tespit edildi. Elde edilen bulgular doğrultusunda, rekombinant Erp'nin altünite tüberküloz aşısı geliştirmede kullanılabileceği düşünülmektedir.
Özet (Çeviri)
BCG is the only vaccine against tuberculosis caused by Mycobacterium tuberculosis bacteria. Effective new tuberculosis vaccines need to be developed because this vaccine is insufficient in adults. In this thesis, erp gene from Mycobacterium tuberculosis strain isolated from a tuberculosis patient in Turkey was cloned into pGEM-T, followed by pET28-a vector and transferred to E. coli BL21 strain. His-tagged recombinant Erp protein expressed in E. coli was purified using nickel columns and the vaccine formulations were prepared by mixing 7: 3 with Montanide ISA 720 VG, an oil-based adjuvant. The antigenic properties of the recombinant protein were qualitatively visualized by Western blotting. When using recombinant protein and BCG vaccine-specific serum, the expected large bands were observed, but no band was observed when only adjuvant-specific serum was used. Simultaneously, the humoral and cellular immunity triggering capacity of the recombinant protein was assessed. When comparing pre- and post-immunization IgG values, it was determined that the prepared vaccine formulation significantly increased the humoral immune response. The cellular immunity triggering capacities of this formulation were measured by serum interferon-gamma (IFN-γ) and interleukin-12 (IL-12) levels. Erp formulation was found to be as effective as BCG in increasing IFN-γ levels. Erp formulation was found to provide higher levels of IL-12 than BCG on days 15 and 30. It is thought that recombinant ERP can be used to develop the subtype tuberculosis vaccine in the direction of the obtained findings.
Benzer Tezler
- Mycobacterium tuberculosis complex kökenlerinin MB/BacT sistemi ile ilaç duyarlılıklarının saptanması ve sistemin standardize edilmesi
Başlık çevirisi yok
MEHMET ALİ DİBEK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1999
MikrobiyolojiEge ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALTINAY BİLGİÇ
- Mycobacterium tuberculosis tanısında polimeraz zincir reaksiyonu tekniğinin kullanımı
The Utility of polymerase chain reaction in the diagnosis of mycobacterium tuberculosis
SEZGİN GÜNEŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
1999
Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon HastalıklarıOndokuz Mayıs ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HASAN BAĞCI
- Çok ilaca dirençli mycobakterium tuberculosis suşlarının moleküler karakterizasyonu
Molecular characterization of multidrug resistant mycobacterium tuberculosis strains
ÜMİT ALANBAYI
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2013
MikrobiyolojiKırıkkale ÜniversitesiTemel Tıp Bilimleri Bölümü
PROF. RIZA DURMAZ
- Mycobacterium tuberculosis klinik izolatlarında ilaç direncinin multipleks 'Real-Time PCR' yöntemiyle saptanması
Detection of drug resistance in mycobacterium tuberculosis clinical isolates by multiplex Real-Time PCR
FATMA NUR AKDOĞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
MikrobiyolojiHacettepe ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ZEYNEP SARIBAŞ
- Mycobacterium tuberculosis man-lam antijeninin fibroblast-makrofaj kokültür modelinde makrofaj polarizasyonuna etkisinin araştırılması
Investigation the effect of mycobacterium tuberculosis man-lam antigen on fibroblast–macrophage coculture model to the macrophage
NURHAN ALBAYRAK
Doktora
Türkçe
2014
Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon HastalıklarıGazi Üniversitesiİmmünoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EMİN ÜMİT BAĞRIAÇIK