Geri Dön

Şarbon aşı adayı olarak PA83'ün yeni mutant formunun N. benthamiana bitkisinde tasarlanması, ekspsresyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu

Engineering, expression, purification and characterization of new mutant form of PA83 in N. benthamiana plants as antrax vaccine candida

PDF İndir

  1. Tez No: 484572
  2. Yazar: RIFAT ÜNGÖR
  3. Danışmanlar: PROF. DR. TARLAN MAMMEDOV
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Genetik, Bioengineering, Biotechnology, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2017
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 47

Özet

Bacillus anthracis potansiyel biyolojik savaş ajanı olarak bilindiğinden beri, güvenli, düşük maliyetli, etkinliği yüksek ve uzun süreli stabiliteye sahip şarbon aşısını geliştirebilmek oldukça yüksek önem taşımaktadır. Son yıllardaki çalışmalar yüksek ekspresyon kapasitesi ve değerli rekombinant proteinlerin güvenli, hızlı ve ucuz üretimine olanak sağlaması nedeniyle bitki temelli transient ekspresyon sisteminin umut vaad edici teknoloji olduğunu göstermektedir. B. Anthracis'in bitkide üretilen koruyucu antijeni (PA) şarbona karşı güvenli, etkili ve düşük maliyetli aşı geliştirmede büyük potansiyele sahiptir. B. Anthracis'in koruyucu antijeni glikoprotein değildir. Buna rağmen, dizisi 9 tane olası potansiyel glikolizasyon bölgesine sahiptir ve Nicotiana benthamiana bitkilerinde eksprese edildikleri zaman aşırı derecede glikozillenme gösteriyorlar. Son zamanlarda PA83 antijeninin glikozillenmemiş versiyonları, ya in vivo deglikolizasyon stratejisi (PNGase F veya Endo H temelli), (Mamedov vd. 2012; Mamedov vd. 2016; Mamedov vd. 2017) ya da mutasyon (6 tane N-glikolizasyon bölgesine yönlendirilmiş mutagenez), (Mamedov vd. 2016) yaklaşımı vasıtasıyla üretilebilmiştir. PA83'ün bu mutant formunu analiz ettiğimizde, bir önceki çalışmada mutasyon yapılmamış bölge olan fakat glikozillenme düzeyine sahip olan bir bölge olan Asn-39'u bulduk. Bu çalışmada, koruyucu antijeninin Asn-39 dahil 7 tane N-glikolizasyon bölgesinin mutasyonu ile oluşturulmuş yeni mutant formu tasarlandı, kodon optimize edildi, eksprese edildi ve N.benthamiana bitkisinde üretildi. Kıyaslama yapabilmek amacıyla PA83'ün 6 olası N-glikolizasyon bölgesinde nokta mutasyonu taşıyan versiyonu N.benthamiana bitkisinde üretildi. PA83'ün her iki mutant formu IMAC afinite kolon kromatografisi yöntemi kullanılarak saflaştırıldı ve saflaştırılmış protein stabilite analizi için değerlendirildi. ANAHTAR KELİMELER: Geçici gen anlatımı, in vivo deglikolizasyon, Koruyucu Antijen, Şarbon aşı adayı.

Özet (Çeviri)

Bacillus anthracis has long been considered a potential biological warfare agent, and therefore, developing safe, low-cost and highly efficient anthrax vaccine with long-term stability is important. Numerous studies in recent years demonstrated that plant based transient expression system is a promising technology with high expression capacity and provides safe, fast, inexpensive production of valuable recombinant proteins. Plant produced PA of B. anthracis has great potential as a target for a safe, effective, and low-cost vaccine against anthrax. Protective antigen of B. anthracis is not a glycoprotein, however, its sequence has nine potential glycosylation sites and it has been shown to be aberrantly glycosylated when expressed in Nicotiana benthamiana plants. Recently, a non-glycosylated versions of PA83 antigen was produced by in vivo deglycosylation strategy (PNGase F or Endo H based) (Mamedov et al 2012; Mamedov et al 2016; Mamedov et al 2017) or by site-directed mutagenesis-based approach, by mutation of six N-Glycosylations sites (Mamedov et al 2016). When we analyzed this mutant form of PA83, we found that Asn-39 site, which was not mutated in the previous studies has some level of glycosylation. In this study, a new mutant form by mutation of seven N-glycosylation sites (including Asn-39) of protective antigen was engineered, codon optimized, expressed and produced in N. benthamiana plant. For comparison, version of PA83 containing point mutations in six potential N-glycosylation sites was also produced in N. benthamiana. Both PA83 mutants were purified using IMAC affinity column and purified protein were subjected for stability analysis. KEYWORDS: Anthrax vaccine candidate, in vivo deglycosylation, Protective Antigen, Transient gene expression.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    705988

    Production and characterization of heptamerized form of PA83 of Bacillus anthracis in Nicotiana benthamiana plants as vaccine candidate against anthrax

    Başlık çevirisi yok

    NİLÜFER GÜN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    BiyoteknolojiAkdeniz Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TARLAN MAMMEDOV

  2. Tez No

    638059

    Engineering, production, and characterization of glycosylated and in vivo deglycosylated forms of anti-PA83 in Nicotiana benthamiana

    Glikosile ve in vivo deglikosile edilmiş anti-PA83 formlarının Nicotiana benthamiana bitkisinde mühendisliği, üretimi ve karakterizasyonu

    DAMLA YÜKSEL

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2020

    BiyoteknolojiAkdeniz Üniversitesi

    Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TARLAN MAMEDOV

  3. Tez No

    666659

    Endo H ile deglikozile edilmiş PA83 ve PA83 antijenlerinin farklı varyantlarının anti-PA83 monoklonal antikorları ile bağlanma afinite çalışmaları

    Binding affinity studies of Endo H deglycosylated and different variants of PA83 antigens with anti-PA83 monoclonal antibodies

    İREM GÜRBÜZASLAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    BiyoteknolojiAkdeniz Üniversitesi

    Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TARLAN MAMMEDOV

  4. Tez No

    753477

    Türkiye'de insan ve hayvan orijinli bacillus anthracis izolatlarının multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis (MLVA-31) ile moleküler karakterizasyonu

    Molecular characterization of bacillus anthracis isolates of human and animal origin by multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis (MLVA-31) in Turkey

    SÜLEYMAN YALÇIN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik MikrobiyolojiAnkara Üniversitesi

    Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BARIŞ SAREYYÜPOĞLU

    PROF. DR. SELÇUK KILIÇ

  5. Tez No

    731835

    COVID-19 pandemi sürecindeki küresel aşı çalışmalarının incelenerek ulusal KBRN savunması kapsamında biyolojik harp maddelerine karşı aşı geliştirilmesine yönelik yol haritasının oluşturulması

    Determining a road map on vaccine development against biological warfare agents within the scope of national CBRN defence by reviewing global efforts on developing COVID-19 vaccines

    BEYZA ŞEREFOĞLU GÜN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Kamu YönetimiMilli Savunma Üniversitesi

    KBRN-P Savunma Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SERMET SEZİGEN

Geri Dön