Geri Dön

Okratoksin A tayini için monolitik afinite kolonlarının hazırlanması ve iki-boyutlu HPLC sisteminde çevrimiçi analizlerin incelenmesi

Preparation of monolithic affinity columns for ochratoxin A determination and investigation of online analyses in the two-dimensional HPLC systems

PDF İndir

  1. Tez No: 493916
  2. Yazar: CANAN ARMUTCU ÇORMAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. ADİL DENİZLİ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Kimya, Biochemistry, Chemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2017
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 126

Özet

Sunulan tez kapsamında, besinlerdeki Okratoksin A (OTA) seviyelerinin insan sağlığı açısından tolere edilebilir düzeyde olup olmadığını gözlemleyebilmek için OTA tayinine yönelik monolitik afinite kolonlarının hazırlanması ve eş zamanlı olarak analizlerin iki-boyutlu HPLC (2D-HPLC) sisteminde incelenmesi hedeflenmiştir. Çalışmada son yılların gözde araştırma konuları olan monolitik kolonlar, çok-boyutlu kromatografik teknikler ve gıda maddelerindeki mikotoksin analizi konularının birleştirilmesi amaçlanmıştır. Piyasadaki Okratoksin A immünoafinite kolonlarına alternatif kolonlar oluşturmak için çelik HPLC kolonlarında hidrofobik afinite temelli monolitik kolonlar tasarlanmıştır. Bu doğrultuda, ilk olarak hidrofobik ligand olarak kullanılan L-fenilalanin molekülünün polimerleşebilen türevi olan N-metakriloil-L-fenilalanin (MAPA) monomeri sentezlenmiştir. Monolitik kolonlar, MAPA monomeri ile 2-hidroksietil metakrilat (HEMA)'ın yığın polimerizasyonu ile çelik kolonların içerisinde 75°C'lik su banyosunda 3.5 saatte sentezlenmiştir. Monolitik kolonlar, taramalı elektron mikroskobu (SEM), elementel analiz, Fourier dönüşümlü toplam yansıması azaltılmış infrared spektroskopisi (FTIR-ATR), Raman spektroskopisi ve geri basınç-akış hızı ilişkisi yöntemleri ile karakterize edilmiştir. İlk aşamada, hazırlanan monolitik afinite kolonları ile okratoksin A analiz koşullarının optimizasyonu tek-boyutlu HPLC (1D-HPLC) sisteminde incelenmiştir. Optimizasyon çalışmaları kapsamında; OTA derişimi (0.5-20 ng/mL), MAPA monomer miktarı (0-250 µmol), hareketli faz [ACN:H2O (% 2 HAc içeren) (40:60-45:55-51:49-55:45-60:40)], akış hızı (0.25-1.5 mL/dk), sıcaklık (25°C-40°C) ve enjeksiyon hacmi (10-100 µL) etkileri incelenmiştir. Çalışmanın ikinci aşamasında ise hidrofobik temelli monolitik kolonlar birinci boyutta ayrıma kolonu olarak, ters faz C18 kolonu ise ikinci boyutda analitik kolon olarak HPLC sistemine entegre edilmiştir. Gıda maddelerindeki (bira, şarap, mısır ve kahve) OTA eş zamanlı olarak iki-boyutlu HPLC sisteminde analiz edilmiştir. 2-5 ng/mL OTA çözeltileri için gün içi tekrar kullanılabilirlik % RSD değerleri % 0.21-% 0.49 ve % geri kazanım değerleri % 104.44-% 107.33 olarak; günler arası tekrar kullanılabilirlik % RSD değerleri ise % 0.44-% 1.31 ve % geri kazanım değerleri de % 104.34-% 107.03 olarak bulunmuştur. Monolitik kolonların gün içi ve günler arası tekrar kullanılabilirlik değerlerinde belirgin bir azalma olmadan defalarca kullanılabileceği ve bu yüzden piyasada OTA'nın analizinde kullanılan tek kullanımlık immünoafinite kolonlarına alternatif olabileceği kanıtlanmıştır.

Özet (Çeviri)

The aim of this thesis is the preparation of monolithic affinity columns and simultaneous determination of Ochratoxin A (OTA) in food by assessing tolerable levels for humans with two-dimensional HPLC (2D-HPLC) system. It was aimed to combine the hot topics of recent researches such as monolithic columns, multidimensional chromatographic techniques and mycotoxin analysis in foodstuffs. Hydrophobic affinity-based monolithic columns were designed in steel HPLC columns to create alternative columns for disposable OTA immunoaffinity columns on the market. First, the N-methacryloyl-L-phenylalanine (MAPA) monomer which is polymerizable derivative of the L-phenylalanine molecule used as the hydrophobic ligand, was synthesized. Monolithic columns were synthesized by the bulk polymerization of MAPA and 2-hydroxyethyl methacrylate (HEMA) conducted in a steel HPLC column at 75°C (temperature controlled water bath) for 3.5 h. Monolithic columns are characterized by scanning electron microscopy (SEM), elemental analysis, Fourier transform infrared-attenuated total reflectance spectroscopy (FTIR-ATR), Raman spectroscopy and back pressure-flow rate dynamics. In the first step, optimization of the analysis conditions for OTA with the monolithic affinity columns prepared was studied in a one-dimensional HPLC (1D-HPLC) system. In this context, OTA concentrations (0.5-20 ng/mL), MAPA monomer content (0-250 μmol), mobile phase [ACN:H2O (containing 2% HAc) (40:60-45:55-51:49-55:60)], flow rate (0.25-1.5 mL/min), temperature (25°C-40°C) and injection volume (10-100 μL) were investigated. In the second step of the study, two different columns in the first dimension hydrophobic based monolithic columns as separation column and in the second dimension reverse phase C18 column as analytical column were integrated into HPLC system. OTA in foodstuffs (beer, wine, corn and coffee) was simultaneously analyzed in a two-dimensional HPLC system. The intra-day RSD% were varied from 0.21%-0.49% with recoveries obtained varying between 104.44% and 107.33% whereas the inter-day RSD% were varied from 0.44%-1.31% with recoveries found to be 104.34%-107.03% to the concentration of OTA at 2-5 ng/mL. It has been demonstrated that monolithic columns could be used for OTA analysis to alternative single-use disposable immunoaffinity columns on the market, which can be used repeatedly without significant loss in intra-day and inter-day reusability values.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    415238

    Okratoksin a tayini için nanolif kaplı kütle hassas immünosensör hazırlanması

    Preparation of nanofiber coated mass sensitive immunosensor for ochratoxin a detection

    ÖZGE DİNCEL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    BiyomühendislikHacettepe Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SELMA MUTLU

  2. Tez No

    347621

    Gıda örneklerinde aflatoksin (G1, G2, B1, B2) ve okratoksin a'nın HPLC metot validasyonu ve miktar tayinleri

    Method validation and determination of aflatoxin (G1, G2, B1, B2) and ochratoxin a in food samples by HPLC

    IŞIL HACİBEKİROĞLU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    Besin Hijyeni ve Teknolojisiİstanbul Üniversitesi

    Analitik Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UFUK KOLAK

  3. Tez No

    102821

    Okratoksin A'nın modifiye bir yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (YBSK) yöntemi ile tayini ve bazı uygulamaları

    A Modified method for the determination of ochratoxina by high pressure liquid chromatography using fluorescence detector and certain applications

    ÖZLEM BANU KUTLUK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2001

    Eczacılık ve FarmakolojiAnadolu Üniversitesi

    Analitik Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. MUZAFFER TUNÇEL

    Y.DOÇ.DR. GÖKSEL ALTIOKKA

  4. Tez No

    714936

    Tungsten oxide modified electrodes and their electrocatalytic applications

    Tungsten oksit modifiye elektrotlar ve elektrokatalitik uygulamaları

    İREM ÇAKAR DAVASLIOĞLU

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    KimyaEge Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FATMA NİL ERTAŞ

    PROF. DR. SÜLEYMAN KOÇAK

  5. Tez No

    537347

    Ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi yöntemi ile gıdalarda bulunan bazı mikotoksinlerin tayini

    Determination of some mycotoxins in foods by ultra high performance liquid chromatography method

    ZUHAL ARZU ŞENER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    KimyaEskişehir Teknik Üniversitesi

    Analitik Kimya Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ELİF MİNE ÖNCÜ KAYA

Geri Dön