Cloning and expression of TagI endonuclease in E.coli by using the cloning vector pUC18
TaqI endonükleazının pUC18 klonlama vektörü kullanılarak E.coli'ye klonlanması ve üretimi
- Tez No: 50512
- Danışmanlar: PROF.DR. BETÜL KIRDAR, PROF.DR. ZEYNEP İLSEN ÖNSAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya Mühendisliği, Chemical Engineering
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1996
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 99
Özet
ÖZET Restriksiyon endonükleazlan Rekombinant DNA Telmolojisrnin gelişimi açısından çok önemlidir. DNA'yı spesifik dizi bölgelerinden kesebildikleri için özellikle II. tip restriksiyon endonükleazlan büyük önem taşımaktadır. Bu nedenle bu endonükleazlar, gen klonlanması için vazgeçilmezdir. Thermus aquaticus'dan. izole edilmiş bir H tip restriksiyon endonükleazL olan Taql, DNA'yı diğer restriksiyon endonükleazlarma göre çok dana yüksek sıcaklıklarda spesifik bölgelerden (TCGA) kesebilmektedir ve daha kararlı olup, ticari bir ürün olarak daha uzun raf ömrüne sahiptir. Taqfm Thermus aquaticus'dm izolasyonu, enzim kaybı ve yüksek üretim maliyeti gibi teknik zorluklara yol açtığından, bunların giderilmesi için Taql restriksiyon endonükleazmıkodlayan genini?, coli'ye klonlanmasmın gerekli olduğu düşünüldü. Bu çalışmada, Taql restriksiyon endonükleazmı kodlayan gen PCR ile çoğaltıldı ve konak organizma olarak E. co/i'nin TBI susu kullanılarak pUC18 klonlama vektörüne başanb bir şekilde klonlandı. M9 ve G8 olarak adlandırılan iki rekombinant belirlendi ve bunların sitoplazmik Taql üretimi SDS-PAGE analizi ve Taql restriksiyon endonükleaz aktivite testi ile gözlendi Rekombinant hücrelerin ve konak hücrenin büyüme özellikleri de kesikli fermentasyon koşulları altmda belirlendi ve rekombinant M9 ve G8 hücrelerinin maksimum spesifik büyüme hızları (|w) sırasıyla 0.81 hr“1 ve 0.83 hr”1 olarak, konak hücre TBl'ıhki ise 0.84 hr"1 olarak bulundu. Bu sonuçlar, rekombinant vektörün varlığının büyüme üzerine belirgin bir inhibe edici etkisinin olmadığını gösterdi.
Özet (Çeviri)
IV ABSTRACT Restriction endonucleases are very important for the development of Recombinant DNA Technology. Especially, type II restriction endonucleases are very important since they can cleave DNA at sequence specific sites. Therefore, they are essential for gene cloning. TaqI, which is a type II restriction endonuclease isolated from Thermos aquaticus, can cleave DNA at specific sites (TCGA) at temperatures markedly higher than those of other restriction endonucleases and it is more stable with a longer shelf life as a commercial product Since the isolation of TaqI from Thermus aquaticus presents technical difficulties like enzyme loss and high production cost, cloning of the gene encoding TaqI restriction endonuclease into E. coli was considered to be necessary to reduce these technical difficulties. In this study, the gene encoding TaqI restriction endonuclease was amplified by PCR and successfully cloned into the cloning vector pUC18 by using the TBI strain of E. coli as the host organism. Two recombinants, named as M9 and G8 were identified and their cytoplasmic expression was observed by SDS-PAGE analysis and TaqI restriction endonuclease activity assay. The growth characteristics of the recombinant cells and the host cell were also determined under batch fermentation conditions and the maximum specific growth rates (jXmax) of the recombinants M9 and G8 were found as 0.81 hr“1 and 0.83 hr”1, respectively, whereas the u“,ax value of the host cell, TBI, was found as 0.84 hr”1. These results indicated that the presence of the recombinant vector does not seem to have an inhibitory effect on growth.
Benzer Tezler
- Çeşitli ubiquitin aktive edici E1 enziminlerinin ubiquitin benzeri domainlerinin klonlanması, ekspresyonu, saflaştırılması ve izotopik olarak işaretlenmesi
Clonning, expression, purification and isotopic labeling of ubiquitin-like domains of various ubiquitin activating E1 enzymes
NAZLI SÖKMEN
- Cloning and expression of TaqI restriction endonuclease gene using pmal-c2 vector system in different straints of escherichia coli
TaqI restriksiyon endonükleaz geninin pmal-c2 vektör sistemi kullanılarak değişik escherichia coli suşlarında klonlanması ve ekspresyonu
ELİF ÖZKIRIMLI
Yüksek Lisans
İngilizce
1998
Kimya MühendisliğiBoğaziçi ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF.DR. BETÜL KIRDAR
- Anoxybacillus flavithermus bakterisinin ısıl kararlı guanozintrifosfat siklohidrolaz-I geninin klonlanması ve ekspresyonu
Cloning and expression of guanosintriphosphate cyclohydrolase-I from anoxybacillus flavithermus
ÖZLEM HIZAL
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
BiyoteknolojiRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. FATİH Ş. BERİŞ
- ATP-bağımlı ftsH geninin Geobacillus kaustophilus'dan klonlanması ve ekspresyonu
Cloning and expression of ATP-dependent ftsH gene from Geobacillus kaustophilus
AHMET TÜLEK
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
BiyolojiGebze Yüksek Teknoloji EnstitüsüMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. FATMA İNCİ ÖZDEMİR
- Cloning and expression of the pseudomonas KE38 extra-cellular lipase gene in E. coli
Pseudomonas KE38 hücre dışı lipaz geninin klonlanması ve E. coli'de ifadelenmesi
FULYA KARAKAŞ
Yüksek Lisans
İngilizce
2013
Biyoteknolojiİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ALPER ARSLANOĞLU
YRD. DOÇ. DR. H. ÇAĞLAR KARAKAYA