Bacillus pumilus Y7 alkalen proteaz enziminin bentonit ile non-kovalent immobilizasyonu
Non-covalent immobilization of Bacillus pumilus Y7 alkaline protease with bentonite
- Tez No: 521698
- Danışmanlar: DOÇ. DR. YONCA DUMAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Kimya, Biochemistry, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2018
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Kocaeli Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 91
Özet
Proteazlar, proteinlerde bulunan peptit bağlarını katalizleyen enzimlerdir. Doğada yaygın olarak bulunurlar. Bitkisel, hayvansal ve mikrobiyal kaynaklardan izole edilirler. Bu çalışmamızda Bacillus pumilus Y7'den elde edilen alkalen proteaz enziminin, bentonit ile non-kovalent immobilizasyonu gerçekleştirildi. Serbest enzim ve immobilize enzimin kinetik ve termodinamik parametreleri incelendi. SDS-PAGE analizi ile enzimin molekül ağırlığı 15 kDa olarak bulundu, native-PAGE ve zimogram analizi ile de desteklendi. Serbest enzim için optimum pH ve sıcaklık sırasıyla 10 ve 35 ℃, immobilize enzim için optimum pH ve sıcaklık sırasıyla 6 ve 32 ℃ olarak bulundu. Arrhenius aktivasyon enerjileri (Ea) serbest enzim ve immobilize enzim için sırasıyla 15,28 kJ/mol ve 102,4 kJ/mol olarak hesaplandı. 30 ℃'de pH 8'de her iki enzim için Michaelis-Menten sabiti (Km) ve maksimum hızı (Vm) serbest enzim için sırasıyla 6,05×10-6 M ve 20,16 U/mL/min, immobilize enzim için sırasıyla 27,3×10-6 M ve 34,13 U/mL/min olarak bulundu. Enzimlerin turnover sayısı (kcat) ve katalitik performansı (kcat/Km) serbest enzim için sırasıyla 24,39 dk-1 ve 4×106 dk-1M-1, immobilize enzim için sırasıyla 180,4 dk-1 ve 6,6×106 dk-1M-1 olarak bulundu. Serbest enzimin termodinamik parametreleri; ∆G#: 66,21 kJ/mol; ∆G#E-T: -38,31 kJ/mol; ∆G#ES: -30,27 kJ/mol; ∆H#:13,3 kJ/mol; ∆S#: -0,17 kJ/molK ve immobilize enzimin termodinamik parametreleri ∆G#: 61,15 kJ/mol; ∆G#E-T: -56,22 kJ/mol; ∆G#ES: 26,45 kJ/mol; ∆H#: 99,52 kJ/mol; ∆S#: 0,12 kJ/molK olarak hesaplandı.
Özet (Çeviri)
Proteases are enzymes that catalyse the peptide bonds in proteins. They are widely found in nature. They are isolated from plant, animal and microbial sources. In this study, non-covalent immobilization of alkaline protease enzyme from Bacillus pumilus Y7 with bentonite was performed. Kinetic and thermodynamic parameters of free enzyme and immobilized enzyme have been studied. The molecular weight of the enzyme was found 15 kDa by SDS-PAGE analysis and was also supported by native-PAGE and zymogram analysis. Optimum pH for free enzyme and immobilized enzyme were 10.0 and 6.0, respectively and optimum temperature were determined for free enzyme and immobilized enzyme 35 °C and 32 °C, respectively. The Arrhenius activation energies (Ea) were calculated as 15.28 kJ/mole and 102.4 kJ/mole for the free enzyme and the immobilized enzyme, respectively. The Michaelis-Menten constant (Km) and the maximum velocity (Vm) at pH 8, 30 °C for the free enzyme were 6.05×10-6 M and 20.16 U/mL/min respectively, and for the immobilized enzyme 27.3×10-6 M and 34.13 U/mL/min, respectively. The turnover number (kcat) and catalytic performance (kcat / Km) of the enzymes were found to be 24.39 min-1 and 4x106 min-1 for the free enzyme, 180.4 min-1 and 6.6x106 min-1 for the immobilized enzyme in order. Thermodynamic parameters of free enzyme were calculated as; ∆G#: 66.21 kJ/mole; ∆G#E-T: -38.31 kJ/mole; ∆G#ES: -30.27 kJ/mole; ∆H# : 13.3 kJ/mole; ∆S#: -0.17 kJ/moleK and the thermodynamic parameters of immobilized enzyme were calculated as ∆G#: 61.15 kJ/mole; ∆G#E-T: -56.22 kJ/mole; ∆G#ES: -26.45 kJ/mole; ∆H#: 99.52 kJ/mole; ∆S#: 0.12 kJ/moleK.
Benzer Tezler
- Bacillus pumilus Y7 katalaz (katX2) geninin klonlanması
Cloning of catalase (katX2) gene from Bacillus pumilus Y7
GÜNCE GÖÇ
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
BiyokimyaKocaeli ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. YONCA YÜZÜGÜLLÜ KARAKUŞ
- Bacillus pumilus Y7 tarafından üretilen katalaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of catalase enzyme produced by Bacillus pumilus Y7
SEMİH IŞIK
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyokimyaKocaeli ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ YONCA YÜZÜGÜLLÜ KARAKUŞ
- İzmit ve çevresindeki topraklardan izole edilen Bacillus türlerinin moleküler yöntemlerle tanımlanması ve biyokimyasal karakterizasyonu
Biochemical characterization and identification of Bacillus species isolated from Izmit and surrounding soil by using molecular methods
ARZU SERTEL
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
MikrobiyolojiKocaeli ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. YONCA YÜZÜGÜLLÜ KARAKUŞ
- Bacillus pumilus (NRLL B-212) ile pektin ve tarımsal atıklardan pektinaz üretiminin incelenmesi
Investigation of pectinase production from pectin and agricultural wastes by Bacillus pumilus (NRLL B-212)
ÖZLEM TEPE
Doktora
Türkçe
2012
Çevre MühendisliğiFırat ÜniversitesiÇevre Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ARZU Y. DURSUN
- Doğal kaynaklardan izole edilen Bacillus pumilus'un 16S rRNA ile moleküler tanımlanması, kitinaz enzimi aktivitesi, endüstriyel uygunluğunun araştırılması
A study on the molecular identification of Bacillus pumilus isolated from natural sources by 16S rRNA, chitinase enzyme activity and its potential industrial bene fitability
YAKUP EMRE KIZILER
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyoteknolojiAtatürk ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NESLİHAN DİKBAŞ