Geri Dön

Bacillus pumilus Y7 alkalen proteaz enziminin bentonit ile non-kovalent immobilizasyonu

Non-covalent immobilization of Bacillus pumilus Y7 alkaline protease with bentonite

PDF İndir

  1. Tez No: 521698
  2. Yazar: NECLA CENGİZ ŞEKERLİ
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. YONCA DUMAN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Kimya, Biochemistry, Chemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2018
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Kocaeli Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 91

Özet

Proteazlar, proteinlerde bulunan peptit bağlarını katalizleyen enzimlerdir. Doğada yaygın olarak bulunurlar. Bitkisel, hayvansal ve mikrobiyal kaynaklardan izole edilirler. Bu çalışmamızda Bacillus pumilus Y7'den elde edilen alkalen proteaz enziminin, bentonit ile non-kovalent immobilizasyonu gerçekleştirildi. Serbest enzim ve immobilize enzimin kinetik ve termodinamik parametreleri incelendi. SDS-PAGE analizi ile enzimin molekül ağırlığı 15 kDa olarak bulundu, native-PAGE ve zimogram analizi ile de desteklendi. Serbest enzim için optimum pH ve sıcaklık sırasıyla 10 ve 35 ℃, immobilize enzim için optimum pH ve sıcaklık sırasıyla 6 ve 32 ℃ olarak bulundu. Arrhenius aktivasyon enerjileri (Ea) serbest enzim ve immobilize enzim için sırasıyla 15,28 kJ/mol ve 102,4 kJ/mol olarak hesaplandı. 30 ℃'de pH 8'de her iki enzim için Michaelis-Menten sabiti (Km) ve maksimum hızı (Vm) serbest enzim için sırasıyla 6,05×10-6 M ve 20,16 U/mL/min, immobilize enzim için sırasıyla 27,3×10-6 M ve 34,13 U/mL/min olarak bulundu. Enzimlerin turnover sayısı (kcat) ve katalitik performansı (kcat/Km) serbest enzim için sırasıyla 24,39 dk-1 ve 4×106 dk-1M-1, immobilize enzim için sırasıyla 180,4 dk-1 ve 6,6×106 dk-1M-1 olarak bulundu. Serbest enzimin termodinamik parametreleri; ∆G#: 66,21 kJ/mol; ∆G#E-T: -38,31 kJ/mol; ∆G#ES: -30,27 kJ/mol; ∆H#:13,3 kJ/mol; ∆S#: -0,17 kJ/molK ve immobilize enzimin termodinamik parametreleri ∆G#: 61,15 kJ/mol; ∆G#E-T: -56,22 kJ/mol; ∆G#ES: 26,45 kJ/mol; ∆H#: 99,52 kJ/mol; ∆S#: 0,12 kJ/molK olarak hesaplandı.

Özet (Çeviri)

Proteases are enzymes that catalyse the peptide bonds in proteins. They are widely found in nature. They are isolated from plant, animal and microbial sources. In this study, non-covalent immobilization of alkaline protease enzyme from Bacillus pumilus Y7 with bentonite was performed. Kinetic and thermodynamic parameters of free enzyme and immobilized enzyme have been studied. The molecular weight of the enzyme was found 15 kDa by SDS-PAGE analysis and was also supported by native-PAGE and zymogram analysis. Optimum pH for free enzyme and immobilized enzyme were 10.0 and 6.0, respectively and optimum temperature were determined for free enzyme and immobilized enzyme 35 °C and 32 °C, respectively. The Arrhenius activation energies (Ea) were calculated as 15.28 kJ/mole and 102.4 kJ/mole for the free enzyme and the immobilized enzyme, respectively. The Michaelis-Menten constant (Km) and the maximum velocity (Vm) at pH 8, 30 °C for the free enzyme were 6.05×10-6 M and 20.16 U/mL/min respectively, and for the immobilized enzyme 27.3×10-6 M and 34.13 U/mL/min, respectively. The turnover number (kcat) and catalytic performance (kcat / Km) of the enzymes were found to be 24.39 min-1 and 4x106 min-1 for the free enzyme, 180.4 min-1 and 6.6x106 min-1 for the immobilized enzyme in order. Thermodynamic parameters of free enzyme were calculated as; ∆G#: 66.21 kJ/mole; ∆G#E-T: -38.31 kJ/mole; ∆G#ES: -30.27 kJ/mole; ∆H# : 13.3 kJ/mole; ∆S#: -0.17 kJ/moleK and the thermodynamic parameters of immobilized enzyme were calculated as ∆G#: 61.15 kJ/mole; ∆G#E-T: -56.22 kJ/mole; ∆G#ES: -26.45 kJ/mole; ∆H#: 99.52 kJ/mole; ∆S#: 0.12 kJ/moleK.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    494768

    Bacillus pumilus Y7 katalaz (katX2) geninin klonlanması

    Cloning of catalase (katX2) gene from Bacillus pumilus Y7

    GÜNCE GÖÇ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    BiyokimyaKocaeli Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. YONCA YÜZÜGÜLLÜ KARAKUŞ

  2. Tez No

    521933

    Bacillus pumilus Y7 tarafından üretilen katalaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Purification and characterization of catalase enzyme produced by Bacillus pumilus Y7

    SEMİH IŞIK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyokimyaKocaeli Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ YONCA YÜZÜGÜLLÜ KARAKUŞ

  3. Tez No

    455539

    İzmit ve çevresindeki topraklardan izole edilen Bacillus türlerinin moleküler yöntemlerle tanımlanması ve biyokimyasal karakterizasyonu

    Biochemical characterization and identification of Bacillus species isolated from Izmit and surrounding soil by using molecular methods

    ARZU SERTEL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    MikrobiyolojiKocaeli Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. YONCA YÜZÜGÜLLÜ KARAKUŞ

  4. Tez No

    312145

    Bacillus pumilus (NRLL B-212) ile pektin ve tarımsal atıklardan pektinaz üretiminin incelenmesi

    Investigation of pectinase production from pectin and agricultural wastes by Bacillus pumilus (NRLL B-212)

    ÖZLEM TEPE

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    Çevre MühendisliğiFırat Üniversitesi

    Çevre Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ARZU Y. DURSUN

  5. Tez No

    498382

    Doğal kaynaklardan izole edilen Bacillus pumilus'un 16S rRNA ile moleküler tanımlanması, kitinaz enzimi aktivitesi, endüstriyel uygunluğunun araştırılması

    A study on the molecular identification of Bacillus pumilus isolated from natural sources by 16S rRNA, chitinase enzyme activity and its potential industrial bene fitability

    YAKUP EMRE KIZILER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyoteknolojiAtatürk Üniversitesi

    Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NESLİHAN DİKBAŞ

Geri Dön