Geri Dön

Increase of alpha amylase production of aspergillus oryzae by electroporation

Aspergillus oryza'de alfa amilaz ürtetiminin elektroporasyon yöntemi ile artırılması

  1. Tez No: 56862
  2. Yazar: VELDA ÜNAL
  3. Danışmanlar: PROF. DR. UFUK GÜNDÜZ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Bilim ve Teknoloji, Science and Technology
  6. Anahtar Kelimeler: Aspergillus oryzae, a-amilaz, Gen Transferi, Elektroporasyon Vİİİ, Aspergillus oryzae, a-amylase, Gene Transfer, Electroporation
  7. Yıl: 1996
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 89

Özet

ÖZ ASPERGILLUS ORYZAE' DE ALFA-AMILAZ ÜRETİMİNİN ELEKTROPORASYON YÖNTEMİ İLE ARTIRILMASI ÜNAL, Yelda Yüksek Lisans Tezi, Biyoteknoloji Anabilim Dalı Tez Yöneticisi : Prof. Dr. Ufuk GÜNDÜZ Yardımcı Tez Yöneticisi : Dr. Mehmet Ş. BATUM Şubat 1996, 74 sayfa Bu çalışmanın amacı, Aspergillus oryzae' daki a-amilaz enziminin üretiminin gen aktarımı yöntemi ile arttırılmasıdır. Aspergillus oryzae gıda endüstrisinde sıklıkla kullanılan a-amilaz enzimini üreten bir mantardır. a-Amilaz aktivitesini arttırmak için a-amilaz genini taşıyan paA231 plazmiti ile birlikte baskın seçici bir özellik olan benomile dirençlilik genini taşıyan plazmitler (pBT6, pSV50) aynı anda hücre içine aktarılarak, ko-transformasyon yöntemi uygulanmıştır. Transformasyon için A. oryzae' nin düşük üretimli bir suşu olan amy 72 ile endüstriyel bir suş olan amy+ 60 kullanılmıştır. Çalışmada iki farklı elektroporasyon cihazı denenmiştir. Bunlardan birisi el yapımı diğeri ise piyasada kullanılan elektroporasyon cihazlarrıdandır (Equibio- viEasyject). Equibio- Easyject cihazında elektrik alanı 12500 V/cm ye kadar çıkabilmekte, şok zamanı ayarlanabilmekte buna karşılık el yapımı cihazda 5000 V/cm lik bir elektrik alanı uygulanabilmekte ve şok zamanı sabit kalmaktadır. Bununla birlikte 5000 V/cm lik elektrik alan şiddetinde bile benomile dirençlilik ve yüksek a- amilaz aktivitesi göstere transformant koloniler elde edilebilmiştir. Elektroporasyon parametreleri olarak elektrik alanı, plazmit DNA miktarı ve elektroporasyon sıvı ortamı incelenmiştir. Elektroporasyondan önce amy 72 nın çimlenme oranı %22 bulunurken, elektroporasyon sonrası tek şok (5000 V/cm) veya çift şok (5000 V/cm ve 4000 V/cm) uygulandığında bu oran %12 ' ye düşmüştür. Büyük ölçüde hücre ölümü olmamasına karşın gen aktarımında basan sağlanmıştır. amy 72 suşu ile birlikte pSV50 kullanıldığında ve çift şok uygulandığında elde edilen en yüksek gen aktarım oranı 0.016% ve en yüksek verim 105 transformant/jj,g DNA olarak bulunmuştur. Düşük üretimli amy 72 suşunun a- amilaz aktivitesi 1-2 U/ml iken, elektroporasyon sonrası elde edilen en yüksek a- amilaz aktivitesi 24.3 U/ml olmuştur. Equibio- Easyject kullanıldığında hem amy 72 hem amy 60 suşunda transformasyon denenmiştir. Başlangıçtaki çimlenme oranı %53 iken, tek şok uygulandığında (12500 V/cm, 4.5 milliseconds) bu oran %15'e, çift şok uygulandığında ise (12500 V/cm 0.25 milliseconds, 1000 V/cm 160 milliseconds) %35'e düşmüştür. En yüksek transformasyon oranlan amy" 60 susunda 0.02% ve 17 transformants/|j,g DNA, amy 72 suşunda ise 0.006% ve 5 transformants/jig DNA olarak bulunmuştur. VIIEn yüksek a- amilaz aktivitelerine bakıldığında elektroporasyon sonrası amy 72 suşunda a- amilaz üretimi 25- 50 kat fazlalaşmış, amy+ 60 suşunda ise %30-40' lara varan önemli bir artış gözlenmiştir.

Özet (Çeviri)

ABSTRACT INCREASE OF ALPHA AMYLASE PRODUCTION OF ASPERGILLUS ORYZAE BY ELECTROPORATION ÜNAL, Yelda M.S. in Biotechnology Supervisor: Prof. Dr. Ufuk GÜNDÜZ Co-Supervisor: Dr. Mehmet Ş. BATUM February 1996, 74 pages The objective of this study was to improve the a-amylase production of Aspergillus otyzae by -gene transfer. The fungus produces a-amylase which is commonly used in food industries. In order to improve a-amylase activity, plasmid pctA231, containing the a-amylase gene, was introduced together with plasmids pBT6 and pSV50 carrying benomyl resistance genes, ben, as dominant selectable marker assuming co-transformation. Electroporation technique was used for the transformation of fungal strains. Two strains of A. otyzae, amy 72 (low producer strain) and amy“ 60 (industrial strain) were used as recipients. IIITwo different electroporation equipments were used. One of them was a commercial instrument (Equibio- Easyject) and the other one was a home-made equipment. In the commercial instrument electric fields up to 12500 V/cm could be obtained while in the home made equipment the upper limit for the electric field was 5000 V/cm. The pulse time could also be adjusted in Equibio- Easyject. Even with the low electric fields, such as 5000 V/cm, ben transformants with higher a-amylase activities could be obtained. The electric field strength, electroporation medium and the amount of plasmid DNA were examined as electroporation parameters. It was seen that only 22% of the conidia of amy 72 germinated initially, in the first set of experiments. The number of viable conidia decreased to 12% after single (5000 V/cm) and twin pulses (5000 V/cm and 4000 V/cm). It was seen that the transforments could be obtained without extensive cell death. The highest transformation rate was 0.016% and the highest efficiency was 105 transformants/mg DNA with twin pulses, using pSV50 as marker vector, a- Amylase activity of the low producer amy 72 which was 1-2 U/ml was increased to 24.3 U/ml after electroporation. In the experiments using Equibio- Easyject instrument both amy 72 and amy* 60 strains were used as recipients. The initial germination rate of 53% was decreased to 15% after a single pulse (12500 V/cm, 4.5 milliseconds) and it was 35% after twin pulses (12500 V/cm, 0.25 milliseconds and 1000 V/cm, 160 milliseconds). The highest transformation rates and efficiencies were 0.02% and 17 transformants/)j,g DNA with amy+ 60 while 0.006% and 5 transformants/^ıg DNA with amy 72, using single pulse and pBT6 as marker vector. ivThe highest a-amylase activities indicated 25- 50 folds increase of activity in amy 72 and 30- 40 folds increase of activity in amy+ 60 strains which can be accepted as considerable improvements. In the second part amy”60 was also analyzed and the highest a-amylase activity was obtained as 25 1 U/ml from pSV50 and single pulse.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    876837

    Application of different strategies to improve anaerobic digestion for organic fraction of municipal solid waste

    Kentsel katı atıkların organik fraksiyonunun anaerobik çürütme performansını iyileştirmek için farklı stratejilerin uygulanması

    YAĞMUR KABAKCI

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2024

    Çevre Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Çevre Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. OSMAN ATİLLA ARIKAN

    PROF. DR. FEHMİ GÖRKEM ÜÇTUĞ

  2. Tez No

    106340

    Alfa-amilaz ve alfa amilaz-dekstran konjugatların spektrofluorometrik yöntemle incelenmesi

    The Examiniation of alpha-amylase-dextran conjugates with spectrofluorometric methods

    MELDA ALTIKATOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2001

    KimyaYıldız Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HURİYE KUZU KARŞILAYAN

  3. Tez No

    45733

    Alfa-Amilaz, üreten bazı bacıllus suşlarının gelişme parametreleri, enzim özellik ve üretim koşullarının optimizasyonu

    Optimization of growth parameters, enzyme characteristics and production conditions of some alpha-amylase producing bacillus strains

    ELİF SARIKAYA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1995

    BiyolojiAnkara Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. VELİTTİN GÜRGÜN

  4. Tez No

    510650

    Production of recombinant amylopullulanase enzyme from Thermoanaerobium brockii brockii

    Thermoanaerobium brockii brockii kaynaklı amilopullulanaz enziminin rekombinant üretimi

    HANDE MUMCU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NEVİN GÜL-KARAGÜLER

  5. Tez No

    476729

    Tahıl-baklagil unu karışımlarının ticari ve geleneksel Türk ekmeklerinde kullanımı

    Usage of cereal-legume flour blends in commercial and traditional Turkish breads

    ELİF YAVER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Gıda MühendisliğiNecmettin Erbakan Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NERMİN BİLGİÇLİ

Geri Dön