Geri Dön

Improvement of germ stem cell pool by leptin supplementation and gene editing for male infertility

Erkek infertilitesi için germ kök hücre havuzunun leptin ilavesi ve gen düzenleme ile iyileştirilmesi

PDF İndir

  1. Tez No: 629467
  2. Yazar: NİLGÜN YERSAL
  3. Danışmanlar: PROF. DR. PETEK KORKUSUZ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Histoloji ve Embriyoloji, Histology and Embryology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2020
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 152

Özet

İnfertilite çiftlerin %12-15'ini etkiler ve erkek faktörler bu vakaların %30-55 nedenidir. Travmalar, genetik bozukluklar, immusupresif ve kanser tedavileri, infertiliteye neden olsa da birçok infertil vaka idiyopatiktir. Kanser tedavi sırasında gonadotoksik tedavilere maruz kalan çocukluk çağı kanser hastaları için en önemli sorunlardan birisi fertilitenin devamının sağlanmasıdır. Bu hastalar için tedavi öncesi spermatogonyal kök hücreler (SKH) içeren testiküler dokuların dondurulması fertilitenin korunmasında tek etkili yoldur. Küçük testis biyopsi dokularından elde edilen SKH'lerin transplantasyon öncesi in vitro koşullarda kültüre edilmesi ve çoğaltılması gerekmektedir, Sperm elde edilmesi veya SKH kültürü MCM8 gen bozukluğu olan infertil olan hastalarda mümkün değildir. Bu infertil olan hastalar için, somatik hücrelerinden elde edilen indüklenmiş pluripotent kök hücreler (İPKH) mutasyon düzeltildikten sonra germ kök hücrelerine farklılaştırılabilir. Bu tez çalışmasının hipotezi, leptin ilavesi SKH havuzunu zenginleştirebilir ve azoospermik Mcm8-/- fare modelinde mutasyon CRISPR/Cas9 ile düzeltildikten sonra primordiyal germ hücre benzeri hücrelere farklılaştırılabilir. C67BL/6 neonatal SKH izole edilip, kültüre edildive kültüre SKH' ler leptin (0-200 ng/ml) ile muamale edilerek proliferasyon testleri ile etki ve western blotlama ile ERK ve STAT3 yolakları üzerinden etkinin mekanizması araştırıldı. 100 ng/ml leptin SKH çoğalmasını ERK and STAT3 sinyal yolakları üzerinden arttırdı. Mcm8-/- fibroblastlardan iki yeni İPKH hattı (591ve 574) üretildi. CRISPR/Cas9 gen düzenleme ile bir alleli mutasyon olmayan Mcm8 gen dizisi içeren koloni (Mcm8gc-/-) (591-14) elde edildi. Mutasyonu düzeltilmiş olan heterozigot koloniden SSEA1+/CD61+ primordiyal germ hücre benzeri hücreler farklılaştırıldı. Bu çalışma, çocukluk çağı kanser hastalarında, SKH havuzunun in vitro olarak transplantasyon öncesi çoğaltılması ve spermatogenez restorasyonuna ve tek gen mutasyonu nedeniyle infertil olan hastalarda mutasyonun CRISPR/Cas9 gen düzenleme teknolojisi ile düzeltilmesine olanak sağlar.

Özet (Çeviri)

Infertility affects up to 12-15% of sexually active couples, and male factors contribute about 30-55% of these cases. Infertility can be caused by injuries, genetic factors, exposure to toxicants, immune-suppressive and anti-cancer treatments, but a large number are unexplained (idiopathic). Impairment of fertility is a major concern for the pediatric cancer survivors (PCSs). Freezing of testicular tissue containing spermatogonial stem cell (SSCs) is the only option to preserve the fertility. Sperm collection or culture of SSCs are not available in azoospermic patients with MCM8 gene disorders. For these infertile men, somatic cells can be reprogrammed into induced pluripotent stem cells (iPSCs) and differentiated into germ cells after correction of mutation via gene editing. Culture is critical to expand the number SSCs from small biopsies obtained from the testes of prepubertal patients prior to transplantation and to enable gene editing if SSCs or iPSCs for patients with genetic infertility. We tested the hypothesis that leptin supplementation may induce proliferation of neonatal mouse SSCs in vitro via ERK and/or STAT3 pathways. We also hypothesized that Mcm8 mutation may be corrected by CRISPR/Cas9 to produce gene edited primordial germ cells like cells (PGCLCs) that could be transplanted to restore fertility in Mcm8-/- infertile mouse. C57BL/6 neonatal SSCs were cultured and treated with leptin (0-200 ng/ml). 100 ng/ml leptin supplementation enhances proliferation SSC cultures via ERK and STAT3 pathways. Two novel Mcm8-/- mouse iPSC lines (591 and 574) were generated from Mcm8-/- mice fibroblasts. A validated Mcm8-/- iPSC (591-14) clone was gene-edited via CRISPR/Cas9 and identified with one Mcm8 allele corrected back to the wild type by DNA sequencing. Gene-corrected (Mcm8gc/-) clone 14 was differentiated to PGCLCs that exhibited a SSEA1+/CD61+ phenotype. These studies may allow the expansion of SSC pool, in vitro, prior to auto-transplantation to regenerate spermatogenesis in cancer survivors and correction of single gene mutation causing infertility by CRISPR/Cas9 tool in infertile male.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    688683

    Oleojelasyon ile ruşeym yağının fonksiyonel özelliklerinin geliştirilmesi

    Improvement of functional properties of wheat germ oil using oleogelation

    KÜBRA GÜLDEMİR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    Gıda Mühendisliğiİnönü Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. İHSAN KARABULUT

  2. Tez No

    271598

    Prenatal faktörlerin mide kanseri gelişimi üzerine etkisi

    The effect of prenatal factors in improvement of gastric cancer

    MUSTAFA KARAGÜLLE

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    GastroenterolojiKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Dahiliye Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HALİL KAVGACI

  3. Tez No

    749743

    Karakılçık buğday unundan hazırlanan ekşi mayalı ekmeklerin duyusal özelliklerinin geliştirilmesine yönelik bir araştırma

    A study on the improvement of the sensory properties of sourdough breads prepared from karakilçik wheat flour

    AYLİN KARAPINAR KESERLİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Gastronomi ve Mutfak Sanatlarıİstanbul Gelişim Üniversitesi

    Gastronomi Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ MURAT DOĞAN

  4. Tez No

    347809

    Kronik alkolik sıçanlarda oluşan testis hasarı üzerine Chrysin' in koruyucu etkisinin histolojik olarak incelenmesi

    The effect of chronic alcoholic 's in rats on testicular damage preventive of chrysin as histological investigation

    MERVE BAĞIŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    Histoloji ve EmbriyolojiEskişehir Osmangazi Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. CENGİZ BAYÇU

  5. Tez No

    482731

    Çocuk onkoloji hastalarında erken dönem akut organ toksisiteleri, biyokimyasal ve metabolik değişikliklerin değerlendirilmesi

    Evaluation of early acute organ toxicity, biochemical and metabolic changes in pediatric oncology patients

    HASAN TÜRKMEN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıUludağ Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. METİN DEMİRKAYA

Geri Dön