Akciğer kanseri hücre dizilerinde MYC onkogeni ile ilişkili mikrorna'ların kanser hücre metabolizmasındaki rollerinin araştırılması
Searching The Role of MYC Oncogene Related MicroRNAs on Cancer Cell Metabolism in Lung Cancer Cell Lines
- Tez No: 646039
- Danışmanlar: PROF. DR. HAKAN AKÇA
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Pamukkale Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 150
Özet
Akciğer kanserlerinin %15-20'ni oluşturan küçük hücreli akciğer kanseri (KHAK) yüksek ölüm oranı ve agresif fenotiple karakterizedir. KHAK'lerinde en sık gözlenen genetik değişimler tümör baskılayıcı TP53 ve RB1 ile MYC ailesi onkogenlerde gözlenen değişimlerdir. Myc geni KHAK olgularının yaklaşık %20'sinde aşırı ifade ya da amplifikasyonu gözlenmektedir. Bu sebeple Myc geni KHAK tedavisi için önemli bir hedeftir. Myc pek çok biyolojik süreci düzenleyen önemli bir transkripsiyon faktörüdür. Çalışmamızda ilk olarak kalıcı (pCDH-MYC) ve indüklenebilir (pTIJ-MYC) ekspresyon vektörleri ile indüklenebilir baskılama vektörleri (pTRIPZ-MYC) tasarlandı. Ardından, Myc ampliikasyonu taşımayan H209 hücreleri pCDH-MYC ile H345 hücreleri pTIJ-MYC ile, Myc amplifikasyonu taşıyan H82 ve N417 hücreleri ise pTRIPZ-MYC ile infekte edildi. Kalıcı infekte edilmiş hücreler puromisin ile seçildikten sonra indüklenebilir vektör sistemleri doksisiklin ile muamele yapılarak Myc ifadesi düzenlendi. Myc ifadesindeki değişimin hücre çoğalması, metabolizma ve gen ekspresyonu üzerine etkisi western blot, gerçek zamanlı PZR, miRNA/mRNA mikrodizin (Affymetrix miRNA 4.0/ Illumina HT-12) ve LC-MS analizi ile araştırıldı. Çalışmada kullanılan hücrelerdeki hücresel proliferasyonun MYC ekspresyonuna bağımlı olduğu belirlendi. Sonrasında, kanser progresyonunda önemli rol oynayan miRNA'ların (miR-9, miR-181, miR-378, vb) ve mRNA'ların (HK2,GLS1,LDHA,vb) ekspresyonları araştırıldı. MYC tarafından düzenlenen metabolik genlerin ekspresyonlarında değişimler saptandı. Bu genlerin fonksiyonları LC-MS analizi ile değerlendirildi. Sonuçlarımız, MYC amplifikasyonuna sahip KHAK hücrelerinin sağkalımı için MYC'e bağımlı olduklarını göstermiştir. Bu çalışmanın KHAK'lerinde ileriki terapötik stratejilerin gelişiminde MYC tarafından düzenlenen metabolik genlerin önemini vurguladığı kanısındayız.
Özet (Çeviri)
Small cell lung cancer (SCLC), which accounts for 15-20% of all lung cancer types, is an aggressive malignancy with an extremely high mortality rate. The most frequently altered genes in SCLC are the tumor suppressor genes TP53 and RB1 and the MYC family oncogenes MYC, MYCL and MYCN. Overall, MYC genes are amplified and overexpressed in 20% of SCLCs, showing that MYC proteins are strong candidates as therapeutic targets in SCLC. MYC acts as a transcription factor that coordinates many biological processes. In this study, at first two lentiviral vectors for the constitutive (pCDH-MYC) and the inducible (pTIJ-MYC) expression of MYC and a lentiviral vector for the inducible down-regulation of MYC (pTRIPZ-MYC) were constructed. Subsequently, we infected MYC-non amplified SCLC cell lines, H209, with pCDH-MYC and H345 with pTIJ-MYC, and two MYC-amplified and over-expressing SCLC cell lines, N417 and H82, with pTRIPZ-MYC. Stable infected cells were selected with puromycin and for the inducible expression systems, MYC was over-expressed or down-regulated by addition of doxycycline. The effects of MYC over-expression or down-regulation on cellular proliferation, metabolism and gene expression were evaluated by western blot, qRT-PCR, miRNA/mRNA microarray (Affymetrix miRNA 4.0/ Illumina HT-12) and LC-MS analysis. Cellular proliferation was found to be dependent on the expression of MYC on the cells used in this study. Then, we evaluated the expression of miRNAs (miR-9, miR-181, miR-378, etc) and mRNAs (HK2,GLS1,LDHA,etc) that play an important role in cancer progression. We observed alterations in the expression of several MYC-regulated metabolic genes. The functions of these genes were analyzed by performing LC-MS analysis. Our results indicate that SCLC cells with MYC amplification are addicted to MYC for their survival. In our belief, this study highlights the relavance of Myc-regulated metabolic pathways for the development of future therapeutic strategies in SCLC.
Benzer Tezler
- Akciğer kanseri hücre dizilerinde hipoksi indüklenebilir faktör-1 (HIF-1) ekspresyonunun hücrenin oksidan ve anti-oksidan durumuyla ilişkisinin araştırılması
Investigation of association of hypoxia inducible factor 1(HIF-1) expression with oxidant and anti-oxidant situations of lung cancer cell lines
DUYGU MEYDANCI
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
Tıbbi BiyolojiPamukkale ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. NEDİM KARAGENÇ
- Küçük hücreli akciğer kanseri hücre dizilerinde fibulin-3'ünepitelyal mezenkimal geçiş ve kanser kök hücre fenotipi üzerine etkisinin araştırılması
The effects of fibulin-3 on epithelial mesenchimal transition andcancer stem cell phenotype in small cell lung cancer cells
EGE RIZA KARAGÜR
Doktora
Türkçe
2020
Tıbbi BiyolojiPamukkale ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAKAN AKÇA
- Seramidaz inhibitörü aracılı sitotoksisite ile olası sinyal yolakları bağlantısının kanser hücre dizilerinde incelenmesi
Investigation of the connection of possible signal pathways with ceramidase inhibitor-mediated cytotoxicity in cancer cell arrays
EMRE ÇÖMLEKÇİ
Doktora
Türkçe
2021
BiyolojiEskişehir Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HATİCE MEHTAP KUTLU
- In-vitro evaluation cytotoxic potential of novel isoindole derivatives on various cancer cell lines
Çeşitli kanser hücre dizilerinde yeni izoindol türevlerinin sitotoksik potansiyelinin in-vitro değerlendirilmesi
EGEHAN YEMEZTAŞLICA YETİŞKİN
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
Biyokimyaİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLŞAH ŞANLI MOHAMED
- Alveoler kanser hücre dizilerinde apopitoz mekanizmaları üzerine bortezomibin etkilerinin araştırılması
Investigation of effects of bortezomib on apoptosis mechanisms in the alveolar cancer cell lines
ELVİN ALİYEV
Doktora
Türkçe
2015
BiyokimyaAtatürk ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ABDULKADİR YILDIRIM