Geri Dön

İnsan GCSF proteininin koekspresyon ile çözünür formda üretilmesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu

Production, purification and characterization of human GCSF protein in soluble form with co-expression

  1. Tez No: 659286
  2. Yazar: MUSTAFA SONGUR
  3. Danışmanlar: PROF. DR. İSA GÖKÇE
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Bioengineering, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2021
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Tokat Gaziosmanpaşa Üniversitesi
  10. Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 67

Özet

İnsan granülosit koloni uyarıcı faktör (GCSF) hematopoetik bir büyüme faktörü olup nötrofil yapımında ve farklılaşmasında önemli rol oynamaktadır. Klinikte oldukça önemli bir yere sahip olan GCSF, kemoterapiye bağlı nötropeni ve AIDS tedavisi gibi immün sistemin ihtiyaç duyduğu nötrofil seviyesine ulaşmasına yardımcı olması amacıyla kullanılmaktadır. GCSF gibi özellikle insan kökenli olan bazı yabancı biyomoleküller Escherichia coli (E. coli) ekspresyon sistemi ile ekspresyonu sırasında farklı etmenlerden dolayı bazen agregasyona uğrar ve inklüzyon cisimciği oluştururlar. Bu çok değerli moleküllerin geri kazanımı için çoğu zaman yeniden katlama (refolding) işlemleri uygulanır, fakat yine de kayda değer miktarda protein kullanılamaz halde kalır. Refolding işlemleri hem masraflı hem zaman alıcı hem de tam verimli etkiye sahip olmamaktadır. Bu nedenlerden dolayı, bu tez çalışmasında koekspresyon yöntemi ile şaperon proteinlerin kullanılması düşünülmüştür. Bu kapsamda beş şaperon plazmit sistemi kullanılarak (pG-KJE8, pGro7, pKJE7, pG-Tf2, pTf16) GCSF'nin çözünür formda üretimi sağlanmaya çalışılmıştır. Yapılan deneyler sonucunda pKJE7 plazmidinin GCSF'yi çözünür formda elde etmede daha etkili olduğu bulunmuştur. Bu sistem ile koeksprese edilen GCSF proteini afinite kromotografisiyle yüksek saflıkta elde edilmiş ve insan göbek bağı endotel hücreleri (HUVEC) üzerindeki proliferatif aktivitesi ortaya koyulmuştur. Sonuç olarak, daha önce E. coli ekspresyon sisteminde inklüzyon cisimciği olarak çöken GCSF, şaperon proteinler ile koekspresyon neticesinde doğru şekilde katlanarak, işlevsel ve saf olarak elde edilmiştir.

Özet (Çeviri)

Human granulocyte colony stimulating factor (GCSF) is a hematopoietic growth factor and plays a crucial role in neutrophil production and differentiation. GCSF, which has a very important place in the clinic, is used to help the immune system up to the level of neutrophils required by the immune system, such as chemotherapy-induced neutropenia and AIDS treatment. Some foreign biomolecules, especially of human origin, such as GCSF, sometimes aggregate because of different factors during expression and creates inclusion bodies in E.coli expression system. Refolding process is often used to recover these very valuable molecules, but still significant amounts of protein remain unusable. Refolding processes are both costly, time consuming and not fully efficient. For these reasons, the use of chaperone proteins by co-expression method has been considered in this thesis study. In this context, using five chaperone plasmid systems (pG-KJE8, pGro7, pKJE7, pG-Tf2, pTf16) it has been tried to produce GCSF in soluble form. As a result of the experiments, it was found that pKJE7 plasmid is more effective in obtaining GCSF in soluble form. GCSF protein co-expressed with this system was obtained in high purity by affinity chromatography and its proliferative activity on human umbilical cord endothelial cells (HUVEC) was demonstrated. As a result, GCSF, which previously aggregated as an inclusion body in the E. coli expression system, was correctly folded by co-expression with chaperone proteins and was obtained as functional and pure.

Benzer Tezler

  1. The productıon and pegylatıon of recombinant human granulocyte colony-stımulatıng factor produced ın e. coli

    Rekombinant insan granulosit koloni stimülan faktörünün e. coli'de üretimi ve pegilasyonu

    NAZLI DİLARA ERDOĞDU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    Biyokimyaİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY

  2. Separation and purification of recombinant proteins by using ultrafiltration membranes

    Ultrafiltrasyon membranları ile rekombinant proteinlerin ayırımı ve saflaştırılması

    BEGÜM AKCAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2017

    Kimya MühendisliğiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. PINAR ZEYNEP ÇULFAZ EMECEN

    PROF. DR. PINAR ÇALIK

  3. Cloning, production, purification, and characterization of granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF)

    Granülosit-koloni uyarıcı faktörü (G-CSF) klonlanması, üretimi, saflaştırma ve karakterizasyonu

    CANSIN KIRMAÇOĞLU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY

  4. Kan kanseri tedavisinde sıklıkla kullanılan insan hematopoetik büyüme faktörlerinden G-CSF ve GM-CSF'ün rekombinant olarak üretilmesi saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Production, purification and characterization of recombinant human hematopoietic growth factors such as G-CSF and GM-CSF which are frequently used in leukemia treatment

    YASEMİN BOZKURT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyomühendislikGaziosmanpaşa Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ SEÇİL ERDEN TAYHAN

  5. Granulocyte-colony stimulating factor analog production by recombinant Escherichia coli

    Rekombinant Escherichia coli ile granülosit-koloni uyarıcı faktör analogu üretimi

    ONUR ERSOY

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2017

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. PINAR ÇALIK

    PROF. DR. HASAN ONGUN ONARAN