Geri Dön

İnsan plasental ribonükleaz inhibitörünün heterolog ekspresyonu ve saflaştırılması

Heterologous expression and purification of human placental ribonuclease inhibitor

PDF İndir

  1. Tez No: 695737
  2. Yazar: ÖZNUR CAN
  3. Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ FATMA GEDİKLİ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biyoloji, Biyoteknoloji, Biochemistry, Biology, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2021
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Tokat Gaziosmanpaşa Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 118

Özet

İnsan plasental ribonükleaz inhibitörü (RI), in vivo olarak RNaz aktivitesini düzenleyen ve in vitro olarak RNaz kontaminasyonunun potansiyel bir problem olduğu çeşitli moleküler biyoloji uygulamalarında yaygın olarak kullanılan sitoplazmik bir proteindir. RI, hidrofobik lösin açısından zengin tekrar motiflerinden oluşması ve yüksek miktarda indirgenmiş sistein kalıntıları içermesi gibi benzersiz özellikleri ile ayırt edilmektedir. Rekombinant RI ekspresyonunun, Escherichia coli sitoplazmasında çözünür formda yüksek seviyelere ulaşması son derece zordur. Bu çalışmada RI' nın çözünür ifadesini geliştirmek için N-terminal füzyon ortağı, moleküler şaperonlar seti, indirgeyici ajanlar ve yeniden katlama prosedürleri kullanılmıştır. 6x-His etiketi, sfGFP füzyon etiketi ve TEV proteaz bölgesi içeren bir rekombinant ekspresyon vektörü oluşturularak, ekspresyon için konakçı organizma olarak E. coli BL21 (DE3) suşu tercih edilmiştir. Rekombinant plazmit, BL21 hücrelerine başarılı bir şekilde transforme edilmiştir. İnklüzyon cisimciklerinden geri kazanılan proteini saptamak için SDS-PAGE analizi gerçekleştirilmiştir. 78 kDa moleküler kütleye sahip tek bir bant gözlenmiştir. N terminal etiketi, doğal RI oluşturmak için üretilen TEV proteaz ile uzaklaştırılarak NiNTA agaroz ile protein saflaştırması yapılmıştır. RNA elektroforezi kullanılarak RI' nın aktif olduğu tespit edilmiştir.

Özet (Çeviri)

Human placental ribonuclease inhibitor (RI) is a wide spread cytoplasmic protein regulating RNase activity in vivo and extensively used in a variety of molecular biology applications in vitro where RNase contamination is a potential problem. The RI is distinguished by its unique features, such as being hydrophobic leucine-rich repeat motifs and containing a high amount of reduced cysteine residues. The expression of recombinant RI is extremely difficult to reach high levels in soluble form in the cytoplasm of Escherichia coli. Here, we utilized N-terminal fusion partner, the set of molecular chaperones, reducing agents and refolding procedures to improve the soluble expression of RI. By constructing a recombinant expression vector containing 6x-His tag, sfGFP fusion tag and TEV protease cleavege side, E. coli BL21 (DE3) was preferred as a host strain for expression. The recombinant plasmid was efficiently transformed into competent BL21 host cells. The SDS-PAGE analysis was carried out to detect the expression of protein which recovered from the inclusion bodies. A single band with a molecular mass of 78 kDa was observed. N terminal tags were removed by TEV protease digestion to generate native RI and its purification was performed with Ni-NTA agarose. The activity of RI was determined by using RNA electrophoresis.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    777871

    Kendiliğinden düşük ile sonuçlanan kromozomal olarak normal veya sayısal anomaliye sahip trofoblastik dokularda, plasentogenezde aktivatör ve inhibitör etkili miRNA'ların ekspresyon seviyelerinin araştırılması

    Investigation of expression levels of activator and inhibitor miRNAs in placentogenesis in trophoblastic tissues with chromosomally normal or numerical anomalies that result in spontaneous abortion

    ELVİN KAZANCIOĞLU

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    GenetikGazi Üniversitesi

    Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MERAL YİRMİBEŞ KARAOĞUZ

  2. Tez No

    306018

    Tarama testleri ile gebelikte anöploidi riskinin belirlenmesi ve kantitatif floresan polimeraz zincir reaksiyonu ile prenatal tanısı

    Determination of the risk of aneuploidy by screening tests and prenatal diagnosis by quantitative fluorescent polymerase chain reaction

    ZELİHA ÖZEN GÜÇLÜTÜRK

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyokimyaÇukurova Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET AKİF ÇÜRÜK

  3. Tez No

    11431

    İnsan plasental glutatiyon S-transferazının saflaştırılması ve bazı özellikleri

    Başlık çevirisi yok

    N. NURAY ULUSU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1990

    BiyokimyaHacettepe Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. NAZMİ ÖZER

  4. Tez No

    11437

    İnsan plasental kültür ortamlarında, fibroblast hücre büyümesine etki eden faktörlerin analizi

    Başlık çevirisi yok

    MELTEM ARIKAN(ÇEVİK)

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1989

    MorfolojiHacettepe Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MERAL ÖZGÜÇ

  5. Tez No

    247597

    Hofbauer hücrelerinin plasental damarlanmadaki muhtemel rollerinin araştırılması

    Investigation of the possible roles of hofbauer cells in placental vascularization

    YASEMİN SEVAL ÇELİK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    Histoloji ve EmbriyolojiAkdeniz Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. RAMAZAN DEMİR

Geri Dön