Glutatyon s-transferaz enziminin koyun dalak dokusundan saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of glutathione s-transferase enzyme from sheep spleen tissue
- Tez No: 767298
- Danışmanlar: DOÇ. DR. YUSUF TEMEL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Glutatyon S-Transferaz, saflaştırma, karakterizasyon, koyun, dalak, Glutathıone S-transferase, purification, characterization, sheep, spleen
- Yıl: 2022
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Bingöl Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 64
Özet
Yüksek lisans tezi olarak sunulan bu çalışmada, mikroorganizmalardan memelilere kadar pekçok organizmada yaygın olarak bulunan ve hücre içi majör antioksidan sistem olan glutatyon (GSH) antioksidan sisteminin önemli enzimlerinden glutatyon S-transferaz (GST; EC 2.5.1.18) sitozolik enzimi koyun dalak dokusundan homojenat hazırlanması, salting out (amonyum sülfat tuzu ile çöktürme yöntemi) ve afinite kromatografisi (glutatyon-agaroz) olmak üzere üç adımda 3.67 EÜ/ mg protein değeri (spesifik aktivite) ile %3.73 verim ile 122.3 kat saflaştırıldı. Koyun dalak dokusundan saflaştırılan GST enziminin saflık derecesini belirlemek ve doğal alt birim molekül kütlelerini tespit etmek amacıyla SDS-PAGE metodu kullanıldı. Koyun dalak dokusu GST enziminin alt birimlerine ait molekül kütlesi SDS-PAGE metodu ile yaklaşık 26.36 kDa olarak hesaplandı. Koyun dalak dokusundan saflaştırılan GST enziminin karakterizasyonu için gerçekleştirilen çalışmalarda; optimum pH, K-fosfat tamponu pH=8.0, optimum aktivite gösterdiği iyonik şiddet, K-fosfat tampon çözeltisi 1.0 M, stabil pH, K-fosfat tampon çözeltisi pH = 7.0 ve optimum sıcaklığı 60 oC olarak bulundu. Koyun dalak dokusundan saflaştırılan GST enzimi için gerçekleştirilen kinetik çalışmalarda enzime ait KM ve Vmax değerleri Lineweaver-Burk grafikleri vasıtasıyla hesaplandı. Enzimin substratları olan GSH için KM değeri 0.629 mM, Vmax değeri 0.056 EÜ/mL; 1-Chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB) için KM değeri 0.321 mM, Vmax değeri 0.129 EÜ/mL olarak belirlendi.
Özet (Çeviri)
In this study, common in many organisms from microorganisms to mammals the cytosolic enzyme glutathione S-transferase (GST; EC 2.5.1.18), which is one of the important enzymes of the the major intracellular antioxidant system of glutathione (GSH), purified from sheep spleen tissue was used prepare homogenate, salting out method (ammonium sulfate salt precipitation) and affinity chromatography (glutathione-agarose). SDS-PAGE method was used to determine the purity level of the GST enzyme purified from sheep spleen tissue and to determine the natural subunit molecular masses. The molecular mass of the subunits of the sheep spleen tissue GST enzyme was calculated as approximately 26,36 kDa by SDS-PAGE method. In the studies carried out for the characterization of the GST enzyme purified from sheep spleen tissue; optimum pH, K-phosphate buffer pH=8.0, optimum ionic strength, K-phosphate buffer solution 1.0 M, stable pH, K-phosphate buffer solution pH = 7.0 and optimum temperature 60 oC. In the kinetic studies performed for the GST enzyme purified from sheep spleen tissue, the KM and Vmax values of the enzyme were calculated using Lineweaver-Burk graphs. For GSH, which is the substrate of the enzyme, the KM value was 0,629 mM, the Vmax value was 0,056 EU/ mL; The KM value for 1-Chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB) was determined as 0,321 mM, and the Vmax value was determined as 0,129 EU / mL.
Benzer Tezler
- The Effect of camptothecin, camptothecin-20-acetate and some biologically active compounds on glutathione s-transferase activity
Camptothecin, camptothecin-20-asetat ve biyolojik olarak önemli bazı bileşiklerin glutatyon s-transferaz enzim aktivitesine olan etkisi
ONUR ALPTÜRK
Yüksek Lisans
İngilizce
2001
KimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYHAN SITKI DEMİR
PROF. DR. MESUDE İŞCAN
- Katarakt oluşumu ile detonsifikasyon enzimlerinden glutatyon S-Transferaz (GST) enzimi polimorfizmi ve DNA tamir enzimlerinden XPD enzimi polimorfizmi arasındaki ilişkinin incelenmesi
Evaluation of possible relationship between cataract formation and GST enzyme polymorphism, a member of antioxidant system, and XPD enzyme polymorphism, a DNA repair enzyme
MUSTAFA ÜNAL
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2001
Göz Hastalıklarıİstanbul ÜniversitesiGöz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. KEMAL DİKİCİ
PROF.DR. KAZIM DEVRANOĞLU
- Glutatyon S-transferaz enziminin tavuk karaciğerinden saflaştırılması karakterizasyonu ve bazı pestisitlerin enzim aktivitesi üzerine etkisi
Characterization of glutathion S-transferase enzyme from chicken liver and the effect of some pesticides on enzyme activity
HAKAN YILMAZ
- Glutatyon S-transferaz enziminin Van Gölü balığı (Chalcalburnus tarichi pallas) karaciğerinden saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi
Purification and characterization of glutathione S-transferase from the liver of Van Lake fish and investigation of some metal ions' effects on enzyme activity
MUHAMMET SERHAT ÖZASLAN
- Purification and characterization glutathione S-transferase enzyme from japanese quail (Coturnix coturnix Japonica) heart
Glutatyon S-transferaz enziminin bıldırcın (Coturnix coturnix Japonica) yürek dokusundan saflaştırılması ve karakterizasyonu
BARZAN MIRZA AHMED AHMED