Geri Dön

Thermal stabilitation of pig citrate synthase by croslinking with bisimidoesters

Domuz sitrat sentazının bisimidoesterlerle çapraz bağlama yaparak ısıl stabilizasyonu

  1. Tez No: 82507
  2. Yazar: WASFİ ABDEL KERİM AL-AZZAM
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. UFUK BAKIR
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Domuz Sitrat Sentazı, DMA, DMS, DTBP, F1TR, Kimyasal çapraz bağlama, Isıl stabilizasyon, Bisimidoesterler. vı, Pig Citrate Synthase, DMA, DMS, DTBP, FTTR, Chemical crosslinking, Thermostability, Bisimidoesters. IV
  7. Yıl: 1999
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 81

Özet

oz DOMUZ SURAT SENTAZININ BISIMIDOESTERLERLE ÇAPRAZ BAĞLAMA YAPARAK ISIL STABİLİZASYONU Al-Azzam, Wasfi Abdel Kerim Yüksek Lisans, Biyoloji Bölümü Tez Yöneticisi. Doçent Dr. Ufuk Bakır Yardımcı Yönetici: Prof. Dr. Feride Severcan Haziran 1999, 8r Sayfa Sitrat sentaz (EC 4.1.3.7) iki alt birimden oluşan ve her bir alt birimde bir büyük bir de küçük bölüm bulunan, moleküler ağırlığı yaklaşık 100 kDa olan ve bazı yapısal farklılıklar olmakla birlikte her hücrede bulunan bir enzimdir. Bu çalışmada, domuz kalbi sitrat sentazı (PCS) bir model enzim olarak kullanıldı ve çapraz bağlamanın enzimin ısıl stabilitesine olan etkisi üç farklı çapraz bağlayıcı kullanılarak araştırıldı. Dimetilsuberimidat (DMS), dimetiladipimidat (DMA) ve dimetil 1-3, 3-ditiobispropionimidat (DTBP) çapraz bağlayıcı olarak kullanıldı. Bu maddeler değişik çapraz bağlama boylarına sahip homobifonksiyonel bisimdoesterdir ve protein moleküllerinin sadece amino gruplarını çapraz bağlarar. DMS ve DMA'nın PCS ile çapraz bağlama yapmasıyla PCS enzim aktivitesi çok az değişti. Öte yandan düşük konsantrasyondaki DTBP, PCS aktivitesini yaklaşık olarak % 20-30 civarında düşürdü. Fakat, yüksek konsantrasyonlarda PCS aktivitesi değişmedi. PCS'nin termostabilitesi, her bir çapraz bağlayıcı ile çaprazbağlama yaptığında arttığı halde, DMS ve DMA ile daha iyi sonuçlar verdiler. Detaylı ısıl inaktivasyon deney sonuçlan, 7 ve 19 mM DMS ile çapraz bağlama yapılan enzimlerin stabilizasyon faktör değerlerinin çapraz bağlama yapılmayan enzimlere göre yaklaşık olarak 1.4-2 arasında olduğunu gösterdi ve deneylerde seçilen bütün sıcaklık aralıklarında çapraz bağlama yapılan enzimlerin yan ömürlerinin, çapraz bağlama yapılmayan enzimlerden daha uzun olduğu görüldü. 19 mM DMS ile çapraz bağlama yapıldığında, bu enzimin substratı olan Asetilkolin A'mn Km değeri hemen hemen aynı olmasına rağmen diğer bir substratı olan OAA (Oksaloasetikasit) 'nın Km değeri çapraz bağlama yapmayan enziminkinin yaklaşık % 50' si kadar daha azdı. Buna karşılık, çapraz bağlama yapılan enzimin Vmax değeri, çapraz bağlama yapılmayan enzimin Vmax değerinin yaklaşık olarak yansı kadardı. Bu çalışmanın ikinci bölümünde, doğal PCS'nin ikincil yapısını belirlemek amacıyla Fourier Transform Infrared (FTTR) spektroskopi tekniği kullanıldı. PCS spektrumunun dekonvolüsyonu, spektral bantlann çoğunun“a-helix”,“P-sheet”ve“J3-turn”a karşılık geldiğini gösterdi.“Curve fitting”sonuçlan PCS'nin ikincil yapısının % 80“a-helix”, % 13“P-sheet”, % 1 "p-turn ve yaklaşık % 5'inin belirsiz yapılardan meydana geldiğini gösterdi. Sonuç olarak, FTIR'ın proteinlerin yapısal analizi için çok yararlı bir teknik olduğu görüldü.

Özet (Çeviri)

ABSTRACT THERMAL STABILIZATION OF PIG CITRATE SYNTHASE BY CROSSLINKING WITH B ISIMIDOESTERS Al-Azzam, Wasfi Abdel Kerim M. S., Department of Biology Supervisor: Assoc. Prof. Dr. Ufuk Bakır Co-supervisor: Prof. Dr. Feride Severcan June 1999, pg. 81 Citrate synthase (EC 4.1.3.7) is an enzyme composed of two subunits, each subunit composed of a small and large domain, of total molecular weight around 100 kDa and is present in all living cells with some structural differences. In this study, pig heart citrate synthase (PCS) was used as a model enzyme and the effects of crosslinking on thermal stability of the enzyme by using three different crosslinkers were investigated. The crosslinkers used were dimethylsuberimidate (DMS), dimethyladipimidate (DMA) and dimethyl-3, 3-dithiobispropionimidate (DTBP). These reagents are all homobifunctional bisimidoesters having different crosslinking distances and crosslink only amino groups on protein molecules to each other. Crosslinking of PCS by using DMS and DMA has slightly changed the enzymatic activity. On the other hand, crosslinking by using low DTBP iiiconcentrations has decreased the activity of PCS to about 20-30 %, but at high concentrations PCS activity was not changed. Although thermostability of PCS has been increased upon crosslinking of PCS with all the crosslinkers, DMS and DMA gave better results than DTBP. Detailed thermal inactivation experiments have shown that the crosslinked enzymes with 7 and 19 mM DMS have stabilization factor values about 1.4-2 with respect to native enzyme and the half life values of crosslinked enzymes are more than the native ones at all temperatures chosen in the experiments. The Km of Acetyl CoA was nearly the same upon crosslinking with 19 mM DMS but the Km of OAA decreased approximately 50 %. On the other hand, VmaX of crosslinked enzyme was almost half of the VmaX of the native enzyme. In the second part of this study, Fourier Transform Infrared (FTIR) technique was used for the analysis of secondary structure of native PCS. Deconvolution of PCS spectrum has shown most of the bands representing a- helix, P-sheet and P-turn. Curve fitting has revealed that the secondary structure of PCS mostly composed of 80 % a-helix, 13 % P-sheet, 1 % P-turn and about 5 % undefined structures. In conclusion, FTIR technique has shown as a powerful technique for the structural analysis of proteins.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    706204

    Suni ve sentetik liflerin termal olarak stabilize edilmesi

    Thermal stabilization of man-made and synthetic fibers

    TUBA DEMİREL

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Makine MühendisliğiErciyes Üniversitesi

    Makine Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İSMAİL KARACAN

  2. Tez No

    705662

    Development and characterization of thermal and structural properties of textile fibers

    Tekstil elyafın termal ve yapısal özelliklerinin geliştirilmesi ve karakterize edilmesi

    MD MAHBUBOR RAHMAN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    Tekstil ve Tekstil MühendisliğiErciyes Üniversitesi

    Tekstil Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İSMAİL KARACAN

  3. Tez No

    259397

    Killi zeminlerin mekanik özelliklerinin yüksek sıcaklık ile iyileştirilmesi

    Improvement mechanical properties of clayey soils with high temperature

    OLCAY POLAT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    İnşaat MühendisliğiKocaeli Üniversitesi

    İnşaat Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SAMİ ARSOY

  4. Tez No

    56575

    Stabilization of yeast invertase

    Maya invertazının dayanıklılığının arttırılması

    ÖZLEM KAPLAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1996

    Gıda MühendisliğiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. UFUK BAKIR

  5. Tez No

    120237

    The Investigation of costabilizer effect of long alkyl chain phosphites on the thermal stabilization of poly(vinyl chloride)

    Poli(vinil klorür)'ün ısıl kararlılığı üzerine uzun zincirli alkil fosfitlerin etkisinin incelenmesi

    FİLİZ TURAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2002

    Kimya MühendisliğiEge Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MESUT YENİGÜL

Geri Dön