PKR kinaz aktivasyonunun koryokarsinom hücrelerinde kemoterapötik ajana duyarlılığına etkisi
The effect of PKR kinase activation on the sensitivity of choriocarcinoma cells to a chemotherapeutic agent
- Tez No: 828539
- Danışmanlar: PROF. DR. ABDULLAH YALÇIN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Aydın Adnan Menderes Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 75
Özet
Amaç: Bu çalışmanın amacı hücre kültüründe çoğaltılan koryokarsinom (swan 71) hücrelerinin PKR aktivasyonu sonucunda proliferasyon ve apoptotik özelliklerinin ne şekilde değişeceğini belirmeyi amaçlandı. Ayrca PKR aktivasyonunun koryokarsinom hücrelerinde kemoterapötik ajan doksorubisine karşı duyarlılığını belirleyerek, kanser tedavisinde kullanabilecek bir alternatif olabileceğini göstermeyi hedeflendi. Gereç ve Yöntem: İlk olarak hücre kültürü yöntemiyle insan plasenta trofoblast karsinom swan 71 hücreleri çoğatıldı. Hücreler, doksorubisin grubu ve poly I:C/LPS/doksorubisin grubu olarak iki gruba ayrıldı. Doksorubisin grubunda doksorubisin, farklı dozlarda (0.39 μg/ml, 1.56 μg/ml, 6.25 μg/ml, 25 μg/ml, 100 μg/ml) hücrelere 24 saat boyunca uygulandı. PKR aktivasyonu oluşturmak için ise LPS ve poly I:C swan 71 hücrelerine 48 saat uygulandı. Ardından gruplar; kontrol, doksorubisin, poly I:C/LPS ve poly I:C/LPS/doksorubisin olarak oluşturuldu. Deney gruplarına göre, hücrelere uygulanan 50 μl poly I:C ve 500 μl LPS 48 saat boyunca inkübasyona, 100 μl doksorubusin ise 24 saat inkübasyona bırakıldı. LPS, poly I:C ve doksorubisinin swan 71 hücreleri üzerine olan etkilerine belirlemek için MTT canlılık testi yapıldı. Daha sonra bu gruplar arasında doksorubisin ile 24 ve 48 saat muamele edilen hücrelerde ve poly I:C/ LPS 48 ve 72 saat muamele edilen hücrelerde flow sitometri yöntemiyle canlılığa, nekroz ve apoptoz yolaklarına bakıldı. Son olarak, deney gruplarına doksorubisin 24 saat ve poly I:C/LPS 48 saat muamele edildi ve bu hücrelerden protein izolasyonu metoduyla protein elde edildi. Ardından, bradford deneyi ile elde edilen protein miktarı belirlendi. PKR aktivasyonun tespiti ve PKR aktivasyonunda doksorubisinin etkisini belirlemek için western blot deneyi yapılarak p-PKR ve a-tubuline bakıldı. Bulgular: İlk olarak hücre sayım cihazıyla yapılan deneyde doksorubisinin farklı dozları ile (0.39 μg/ml, 1.56 μg/ml, 6.25 μg/ml, 25 μg/ml, 100 μg/ml) muamele edilen swan 71 hücrelerinde kontrole oranla doza ve zamana bağlı canlılık yüzdesinde konsantrasyon arttıkça istatistiksel olarak anlamlı azalmalar gözlendi (p < 0,05, p < 0,001). Doksorubisinin farklı dozları ile muamele edilen PKR aktive edilmiş hücrelerde, kontrole oranla doza ve zamana bağlı istatistiksel olarak anlamlı azalmalar gözlendi (p < 0,05, p < 0,001). Doksorubisin, PKR aktive edilen hücrelerde, doza bağlı ve zamana bağlı olarak hücreleri öldürücü etkiye direnç sağlamıştır ve istatistiksel olarak anlamlı bulunmuştur. Devamında MTT testi; kontrol, LPS/poly I:C, doksorubisin ve LPS/poly I:C/dox gruplarında değerlendirildi fakat sonuç elde edilemedi. Flow sitometride kontrol, LPS/poly I:C, doksorubisin ve LPS/poly I:C/dox gruplarında 24 ve 48 saat canlılık değerlerine bakıldığında ise poly I:C/LPS grubunda kontrole göre anlamlı derecede artış gözlendi (p
Özet (Çeviri)
Objective: Objective: The aim of this study was to determine how the proliferation and apoptotic properties of choriocarcinoma (swan 71) cells grown in cell culture would change as a result of PKR activation. In addition, it was aimed to determine the sensitivity of PKR activation to the chemotherapeutic agent doxorubicin in choriocarcinoma cells and to show that it can be an alternative that can be used in cancer treatment. Materials and Methods: First, human placenta trophoblast carcinoma swan 71 cells were grown by cell culture method. Cells were divided into two groups as doxorubicin group and poly I:C/LPS/doxorubicin group. In the doxorubicin group, different doses of doxorubicin (0.39 µg/ml, 1.56 µg/ml, 6.25 µg/ml, 25 µg/ml, 100 µg/ml) were applied to the cells for 24 hours. To induce PKR activation, LPS and poly I:C were applied to swan 71 cells for 48 hours. Then the groups; control, doxorubicin, poly I:C/LPS and poly I:C/LPS/doxorubicin. According to the experimental groups, 50 μl of poly I:C and 500 μl of LPS applied to the cells were incubated for 48 hours, and 100 μl of doxorubucin for 24 hours. MTT viability assay was performed to determine the effects of LPS, poly I:C and doxorubicin on swan 71 cells. Then, viability, necrosis and apoptosis pathways were examined by flow cytometry in cells treated with doxorubicin for 24 and 48 hours and in cells treated with poly I:C/LPS for 48 and 72 hours. Finally, experimental groups were treated with doxorubicin for 24 hours and poly I:C/LPS for 48 hours, and protein was obtained from these cells by protein isolation method. Then, the amount of protein obtained by the bradford experiment was determined. In order to detect PKR activation and to determine the effect of doxorubicin on PKR activation, western blot experiment was performed and p-PKR and α-tubulin were examined. Results: Doxorubicin in swan 71 cells treated with different doses (0.39 µg/ml, 1.56 µg/ml, 6.25 µg/ml, 25 µg/ml, 100 µg/ml) in the experiment performed with the cell counter, compared to the control Statistically significant decreases were observed in percent viability as the concentration increased (p < 0.05, p < 0.001). Statistically significant dose- and time-dependent reductions were observed in PKR-activated cells treated with different doses of doxorubicin compared to control (p < 0.05, p < 0.001). Doxorubicin provided dose- and time-dependent resistance to the lethal effect in PKR-activated cells and was found to be statistically significant. In the following, MTT test; were evaluated in the control, LPS/poly I:C, doxorubicin and LPS/poly I:C/dox groups, but no results were obtained. When the 24-hour and 48-hour viability values in the control, LPS/poly I:C, doxorubicin and LPS/poly I:C/dox groups were examined in flow cytometry, a significant increase was observed in the poly I:C/LPS group compared to the control (p
Benzer Tezler
- Plasental trofoblast hücre serilerinde PKR kinaz aktivasyonunun oksidatif stres üzerine etkisi
The effect of PKR kinase activation on oxidative stress response in placental trophoblast cell
RAMAZAN KARAYEL
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Tıbbi BiyolojiAydın Adnan Menderes ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ABDULLAH YALÇIN
- The role of Protein Kinase R in lipotoxicity
Protein Kinaz R'nin lipotoksisitedeki rolü
BÜŞRA YAĞABASAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2013
Biyoteknolojiİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. EBRU ERBAY
- Assessment of the effects of melatonin on the funtional deficits induced by cellular stress in obese donor derived mesenchymal STEM cells
Melatonin'in obez donor mezenkimal kök hücrelerinde hücresel strese bağlı olarak oluşan fonksiyon bozuklukları üzerindeki etkilerinin değerlendirilmesi
ECE GİZEM POLAT
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
BiyolojiHacettepe ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FATİMA SUSANNA FAUSTINA AERTS KAYA
- The role of lipid induced integrated stress response in metaflammation and atherosclerosis
Entegre stres tepkisinin metaflamasyon ve atherosklerozdaki rolü
UMUT İNCİ ONAT
Doktora
İngilizce
2019
Moleküler Tıpİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ EBRU ERBAY
- Enkapsüle sklerozan peritonit rat modelinde imatinib'in etkileri
Effects of imatinib onexperimental model of encapsulating peritoneal sclerosis
ARZU KAHVECİ
Tıpta Yan Dal Uzmanlık
Türkçe
2010
NefrolojiMarmara Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÇETİN ÖZENER