H2o2 ile oksidatif hasar oluşturulan ARPE-19 hücrelerinde resveratrol, lutein ve krosetin'in etkilerinin incelenmesi
Investigation of the effects of resveratrol, lutein and crosetin on H2o2-induced oxidative stress model of ARPE-19 cells
- Tez No: 843634
- Danışmanlar: PROF. DR. VEYSEL LEVENT KARABAŞ
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Göz Hastalıkları, Eye Diseases
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Kocaeli Üniversitesi
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 183
Özet
Amaç: H2O2 ile oksidatif hasar modeli oluşturulan ARPE-19 hücrelerinde, Resveratrol, Lutein ve Krosetin'in antioksidan etkilerini, hücre canlılığını, otofaji ve mitofajiye olan etkilerini araştırmak ve bu etkilerini karşılaştırmak. Gereç ve Yöntem: ARPE hücrelerinde oksidatif hasar, hücrelere 1 saat süre boyunca 800 μM H2O2 maruziyeti sonucu oluşturuldu. Oksidatif hasar sonrası hücreler resveratrolün değişen dozları (0 μM, 50 μM, 100 μM, 150 μM, 200 μM, 250 μM, 300 μM dozlarında) ile inkübe edildikten sonra hücrelerdeki canlılığa olan etkileri %10 WST-1 ile karşılaştırmalı olarak değerlendirildi. WST-1 analizi sonucunda resveratrolün etkili dozu seçildi (100 μM). Lutein ve krosetinin etkin dozu, Kocaeli Üniversitesi Kök Hücre Laboratuvarı'nda daha önce yürütülmüş olan deney düzeneği sonuçları kullanılarak seçildi. Oksidatif hasara uğratılmış ARPE-19 hücreleri ve bu hücrelere tedavi amacıyla farklı dozlarda uygulanan lutein (5 ve 10 μM), krosetin (10 ve 20 μM) ve resveratrolün (100 μM) malondialdehit (MDA), glutatyon (GSH) ve nitrik oksit (NO) oksidatif biyobelirteç seviyeleri üzerine etkileri spektrofotometrik yöntemle tespit edildi. Etkin dozlarla oluşturulan ilaç gruplarının hücrelerle 48 saat inkübasyonu sonrası WST-1 ile hücre canlılık yüzdeleri tespit edildi ve bu yüzdeler kıyaslandı. Otofaji belirteci olan LC3B, mitofaji belirteci olan PINK-1 ve PARKIN otoantikorlarıyla immunfloresan boyama yapılan hücre gruplarının konfokal mikroskopta görüntülemeleri alındı ve bu görüntüler kıyaslandı. Son olarak kontrol, hasar ve ilaç gruplarının her birinde Western Blot yöntemi kullanılarak, LC3B ve PARKIN otoantikorlarının protein ekspresyon seviyelerine bakıldı, bu ölçümler karşılaştırıldı. Bulgular: Kontrol ve hasar grubundaki hücre canlılığı değerlendirildiğinde, hücre canlılığının kontrol grubunun yaklaşık %50'sine düştüğü konsantrasyon 800 μM olarak belirlendi. Resveratrolün hücre canlılığı üzerine en etkili olan dozu 100 μM olarak tespit edildi. Lutein ve krosetinin hücre canlılığı üzerine en etkili dozları, Kocaeli Üniversitesi Kök Hücre Laboratuvarı'nda daha önce yürütülmüş olan deney düzeneği sonuçları baz alınarak kullanıldı. (lutein için 5 ve 10 μM, krosetin için 10 ve 20 μM). Hücre canlılığı yüzdeleri WST-1 ile tespit edildi; büyükten küçüğe olarak kontrol (%100), krosetin 10 (%73,5), krosetin 20 μM (%69,1), lutein 5 (%62,7), lutein 10 μM (%59,3) resveratrol 100 μM (%52,7) ve H2O2 grubu (%0,04) sıralamasını oluşturmuştur. Biyokimyasal analizlerde MDA, GSH ve NO düzeyleri incelendi. H2O2 GSH'ı anlamlı oranda yükseltmiş, MDA ve NO'yu anlamlı oranda azaltmıştır (p
Özet (Çeviri)
Purpose: To investigate and compare the antioxidant effects, cell viability, autophagy and mitophagy effects of resveratrol, lutein and crocetin in ARPE-19 cells in which an oxidative damage model was created with H2O2. Materials and Methods: ARPE cells were exposed to 800 μM H2O2 for one hour to observe oxidative damage. After observing oxidative damage, cells were incubated with varying doses of resveratrol (0 μM, 50 μM, 100 μM, 150 μM, 200 μM, 250 μM, 300 μM), and then the effects on cell viability were compared with 10% WST-1. As a result of WST-1 analysis, the effective dose of resveratrol was selected (100 μM). The effective dose of lutein and crocetin were selected using the results of the experimental setup previously conducted at Kocaeli University Stem Cell Laboratory. Oxidatively damaged ARPE-19 cells and lutein (5 and 10 μM), crocetin (10 and 20 μM) and resveratrol (100 μM) doses which are applied to these cells at different doses for treatment purposes were tested for malondialdehyde (MDA), glutathione (GSH) and NO levels called as oxidative biomarkers, These effects on oxidative biomarkers were determined by spectrophotometric method. After 48 hours of incubation with the drug groups based on effective doses of these cells, cell viability percentages were determined with WST-1 and these percentages were compared. Confocal images of each of the control, injury and drug groups immunofluorescently stained with LC3B, PINK-1 (marker of mitophagy) and PARKIN antibodies were taken and these images were compared. Finally, in these cells the protein expression levels of the autophagy marker LC3B and the mitophagy marker PARKIN antibodies were compared using Western blot method. Results: Cell viability in the control and damage groups was evaluated, and the concentration at which cell viability decreased to approximately 50% of the control group was determined as 800 μM. The most effective dose of resveratrol on cell viability was determined to be 100 μM. The most effective doses of lutein and crocetin on cell viability were used based on the results of the experimental setup previously conducted at Kocaeli University Stem Cell Laboratory (5 and 10 µM for lutein, 10 and 20 µM for crocetin). Cell viability percentages were determined by WST-1 and the ranking from biggest to smallest is such as; control (100%), crocetin 10 (73.5%), crocetin 20 μM (69.1%), lutein 5 (62.7%), lutein 10 μM (59.3%) resveratrol 100 μM (52.7%) and H2O2 group (0.04%). MDA, GSH and NO levels were determined in biochemical analyses. H2O2 significantly increased GSH and significantly decreased MDA and NO (p
Benzer Tezler
- Oksidatif hasar modeli oluşturulan ARPE-19 hücrelerine farklı dozlarda uygulanan kurkumin, krosetin ve luteinin antioksidan ve apoptoz üzerine olan etkilerinin karşılaştırmalı olarak incelenmesi
To arpe-19 cells with an oxidative damage modelcurcumin, crocetin and lutein applied in different dosesantioxidant and its effects on apoptosiscomparative examination
KÜBRA DEMİRCİ KÜÇÜK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2021
Göz HastalıklarıKocaeli ÜniversitesiGöz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. VEYSEL LEVENT KARABAŞ
- Retina pigment epitel hücrelerinde (ARPE-19) hidrojen peroksit ile oluşturulan oksidatif streste pinosembrin ve pinostrobinin hücre canlılığı üzerindeki etkinliğinin araştırılması
Investigation of the effectiveness of oxidative stress pinocembrin and pinostrobin on cell viability of hydrogen peroxide in retinal pigment epithelial cells (ARPE-19)
DERYA KILIÇASLAN
Doktora
Türkçe
2018
BiyomühendislikKahramanmaraş Sütçü İmam ÜniversitesiBiyomühendislik ve Bilimleri Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AKİF HAKAN KURT
- Sumak ekşisinden elde edilen malik asit kalsiyum kompleksinin yapısal karakterizasyonu ve retina hücresinde hidrojen peroksit ile oluşturulan hücre hasarında koruyucu rolünün araştırılması
Structural characterization of malic acid calcium complex obtained from sumak particles and research of protective roller in cell cavity with hydrogen peroxide in retina cell
BİLGE ALLI
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyomühendislikKahramanmaraş Sütçü İmam ÜniversitesiBiyomühendislik ve Bilimleri Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ GÖKHAN CEYHAN
DOÇ. DR. AKİF HAKAN KURT
- Retina pigment epitel hücrelerinde (ARPE-19) oksidatif stres kaynaklı hücre hasarında beyaz dut (Morus alba) fitoöstrojeni oxyresveratrol'ün tedavi ve koruyucu etkilerindeki östrojen reseptörlerinin rolünün araştırılması
Investigation of the role of estrogen receptors in the treatment and protective effects of white mulberry (Morus alba) phytoestrogen oxyresveratrol in oxidative stress-induced cell damage in retinal pigment epithelial cells (ARPE-19)
CANSU KARA ÖZTABAĞ
Doktora
Türkçe
2022
Eczacılık ve FarmakolojiBolu Abant İzzet Baysal ÜniversitesiDisiplinlerarası Sinir Bilimleri Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AKİF HAKAN KURT
- Aromatik ve alifatik yan zincirli bazı aminoasitlerin hidrojen peroksit ile oksidatif hasar oluşturulan Saccharomyces cerevisiae L. üzerindeki biyokimyasal etkileri
Biochemical effects of certain amino acids such as aromatic andaliphatic side chain on Saccharomycesn cerevisiae L. causedoxidative damage by hydrogen peroxide
ZINAH KHUDHAIR ABBAS