Geri Dön

VEGF'e karşı üretilen monoklonal antikorların afinite kromatografisi ve alternatif olarak çoklu mod kromatografi yöntemleri kullanılarak saflaştırılması

Purification of monoclonal antibodies produced against VEGF using affinity chromatography and alternatively multimodal resin chromatography methods

  1. Tez No: 846704
  2. Yazar: YÜKSEL TOPALOĞLU
  3. Danışmanlar: PROF. DR. AYŞEN YARAT
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2023
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Marmara Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya (Ecz) Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 109

Özet

Amaç: Bu çalışmada, hücre kültürü ortamında vasküler endotelyal büyüme faktörü'ne (VEGF) karşı üretilen monoklonal antikorların (mAb) afinite kromatografisi ve alternatif olarak çoklu mod kromatografi yöntemleri kullanılarak saflaştırılması amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Anti-VEFG özelliği gösteren mAb hücre kültürü ile elde edildi. Hem afinite (Protein A) kromatografisi yöntemi ile hem de çoklu mod kromatografi yöntemi kullanılarak elde edilen mAb'lar saflaştırıldı. Ardından, Modde.13 programı ile Deneysel Tasarım (DoE) çalışmaları yardımıyla saflaştırma yöntemleri için optimum koşullar belirlendi. Bu optimum koşullar yardımı ile tekrar çalışmaları gerçekleştirildi. Uygulanan tüm saflaştırma çalışmaları sonucunda elde edilen ürünler HPLC yöntemleri yardımıyla analiz edilip asidik varyant - bazik varyant ve yüksek molekül ağırlıklı (HMWS) - düşük molekül ağırlıklı (LMWS) safsızlıklar açışından değerlendirildi. Gerçekleştirilen saflaştırma çalışmalarının % verim hesapları yapılarak her iki kromatografik yöntem açısından karşılaştırıldı. Saflaştırılan mAb'ların molekül ağırlıkları sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) yöntemi ile tespit edilerek doğrulandı. Bulgular: Hem çoklu mod kromatografi yöntemi hem de Protein A kromatografi yöntemi uygulanarak anti-VEGF özelliği gösteren mAb başarılı bir şekilde saflaştırıldı. Her iki saflaştırma yöntemi ile elde edilen mAb ürünlerinin HMWS-LMWS safsızlık analiz sonuçları birbirleri ile benzerdi. Ayrıca çoklu mod kromatografi ile elde edilen asidik varyant - bazik varyant sonuçları, Protein A kromatografisine kıyasla daha iyiydi. Yük varyantları çoklu mod kromatografi ile daha etkin olarak uzaklaştırıldı. Sonuç: Anti-VEGF özelliği gösteren mAb için, maliyeti daha düşük olan çoklu mod kromatografik saflaştırma yönteminin Protein A kromatografik saflaştırma yöntemine alternatif olabilir.

Özet (Çeviri)

Objective: In this study, it was aimed to purify monoclonal antibodies (mAb) produced against vascular endothelial growth factor (VEGF) in cell culture medium by using affinity chromatography and alternatively multi-mode chromatography methods. Materials and Methods: mAb showing anti-VEFG properties was obtained by cell culture. The mAbs obtained were purified using both the affinity (Protein A) chromatography method and the multi-mode chromatography method. Then, optimum conditions for purification methods were determined with the help of Design of Experiments (DoE) studies with the Modde.13 program. Repeat studies were carried out with the help of these optimum conditions. The products obtained as a result of all purification studies were analyzed with the help of HPLC methods and evaluated in terms of acidic variant - basic variant and high molecular weight (HMWS) - low molecular weight (LMWS) impurities. The % yield of the purification studies was calculated and compared in terms of both chromatographic methods. The molecular weights of the purified mAbs were determined using the sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) method and their accuracy was proven. Results: By applying both the multi-mode chromatography method and the Protein A chromatography method, the mAb showing anti-VEGF properties was successfully purified. HMWS-LMWS impurity analysis results of mAb products obtained by both purification methods were similar to each other. Additionally, the acidic variant - basic variant results obtained with multi-mode chromatography were better then Protein A chromatography. The charge variants were removed more effectively by multimode chromatography. Conclusion: The multi-mode chromatographic purification method with lower expense could be an alternative to the Protein A chromatographic purification method for mAb showing anti-VEGF properties.

Benzer Tezler

  1. AMHR2 reseptörünü hedef alan monoklonal antikorların üretilmesi

    Production of monoclonal antibodies specific for AMHR2 receptor

    HURİYE AKSU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    Tıbbi BiyolojiErciyes Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. AHMET EKEN

  2. Development and structural determination of antiangiogenic recombinant antibody structures for cancer treatment

    Kanser tedavisine yönelik antianjiogenik rekombinant antikor yapılarının geliştirilmesi ve yapısal tayini

    MELİS DENİZCİ ÖNCÜ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    Biyomühendislikİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY

    DR. AYLİN ÖZDEMİR BAHADIR

  3. Skualenin In Vitro yara iyileşme modelinde insan diş eti fibroblastları üzerine etkisi

    Effects of squalene on human gingival fibroblasts in an In Vitro wound healing model

    AKIN ÖZDEMİR

    Diş Hekimliği Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Diş HekimliğiMarmara Üniversitesi

    Periodontoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HAFİZE ÖZTÜRK ÖZENER

  4. The role of oxidative stress factors in the pathophysiology of Ocular Rosacea, analysis of tears and other materials

    Oküler Rosacea patofizyolojisinde oksidatif stres faktörlerinin rolü, gözyaşı ve diğer materyallerin analizi

    NİLÜFER YEŞİLIRMAK

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    BiyokimyaGazi Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NESLİHAN BUKAN

    PROF. DR. JEAN-LOUIS BOURGES

  5. New montgomery modular multiplier architecture

    Yeni montgomery modüler çarpma yapısı

    MEHMET EMRE ÇİFTÇİBAŞI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2006

    Elektrik ve Elektronik MühendisliğiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Elektrik ve Elektronik Mühendisliği Bölümü

    DOÇ.DR. MELEK YÜCEL

    PROF.DR. HASAN GÜRAN