Pleurotus ostreatus mantarından afinite kromatografisi ile tirozinaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve organofosfat pestisitlerinin tirozinaz enzimi üzerine etkilerinin incelenmesi
Purification and characterization of tyrosinase enzyme from pleurotus ostreatus mushroom by affinity chromatography and investigation the effects of organophosphate pesticides on tyrosinase enzyme
- Tez No: 853708
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ ÖZGE ÖZŞEN BATUR, PROF. DR. ŞÜKRÜ BEYDEMİR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Biyokimya, Chemistry, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Enzim aktivitesi, Enzim-inhibisyon yöntemi, Enzimatik esmerleşme, Enzyme activity, Enzyme-inhibition method, Enzymatic browning
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Eskişehir Osmangazi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Tirozinaz (E.C. 1.14.18.1) aktif bölgesinde bakır bulunan, oksidoredüktazların üyesi olan, melanin sentezindeki hız sınırlayıcı adımı katalize eden enzimdir. Melanin, güneşten gelen ultraviyole ışınlarının zararlı etkilerinden korunmamızı sağlayan, hayvanlarda saç, göz ve cilt pigmentasyonundan birincil derecede sorumlu olan indolik yapıdaki bir heteropolimerdir. Tirozinaz, melanin sentezindeki öneminin yanında, kozmetik, tekstil, çevre, gıda ve tıp gibi çeşitli endüstriyel uygulamaları olan önemli bir enzimdir. Tez çalışması kapsamında tirozinaz enzimi yabani ve yenilebilir bir mantar olan Pleurotus ostreatus'tan sırasıyla homojenizasyon, çöktürme, diyaliz ve son olarak Sepharose-4B-L-tirozin-p-aminobenzoik asit afinite jeli kullanılarak %15,14 verimle saflaştırıldı. Enzim saflığının kontrolü, SDS ve doğal jel elektroforezleri kullanılarak yapıldı. Tirozinaz enziminin molekül kütlesi yaklaşık 97 kDA olarak tespit edildi. Tirozinaz enzimini karakterize etmek için, optimum pH ve stabil pH değerleri pH 5,5 ve pH 5,25, optimum sıcaklık değeri ise 20°C olarak belirlendi. Glifosat pestisitinin enzimin aktivitesi üzerine in vitro inhibisyon etkisi incelendi. Aktivite (%) – [I] ve Lineweaver-Burk grafikleri çizildi. Çizilen grafikler ile inhibisyon tipi yarı yarışmalı olarak belirlenerek; eğri denkleminden enzim aktivitesini yarıya düşüren inhibitör konsantrasyonu olan IC50 değeri 0,807 mM ve Lineweaver-Burk grafiğinden inhibitörün enzime olan ilgisini gösteren Ki değeri 2,97 µM olarak hesaplandı.
Özet (Çeviri)
Tyrosinase (E.C. 1.14.18.1) is a copper-containing enzyme in the active site, a member of oxidoreductases, catalysing the rate-limiting step in melanin synthesis. Melanin is an indolic heteropolymer that provides protection from the harmful effects of ultraviolet rays from the sun and is primarily responsible for hair, eye and skin pigmentation in animals. Tyrosinase, besides its importance in melanin synthesis, is an important enzyme with various industrial applications such as cosmetics, textiles, environment, food and medicine. Within the scope of the thesis study, tyrosinase enzyme was purified from Pleurotus ostreatus, a wild and edible mushroom, by following the steps of homogenisation, precipitation, dialysis and finally Sepharose-4B-L-tyrosine-p-aminobenzoic acid affinity gel with a yield of 15,14%. Enzyme purity was controlled by SDS and native gel electrophoresis. The molecular mass of tyrosinase enzyme was determined to be approximately 97 kDa. Tyrosinase enzyme, the optimum pH and stable pH values were pH 5,5 and pH 5,25 and the optimum temperature value was determined as 20°C, respectively. The in vitro inhibition effect of glyphosate pesticide on the activity of the enzyme was also investigated. Activity (%)-[I] and Lineweaver-Burk graphs were plotted. The type of inhibition was determined uncompetitive with the graphs drawn; IC50 value, which is the inhibitor concentration that halves the enzyme activity from the curve equation, was calculated as 0,807 mM and Ki value, which shows the interest of the inhibitor to the enzyme from the Lineweaver-Burk graph, was calculated as 2,97 µM.
Benzer Tezler
- İstiridye mantarından (Pleurotus ostreatus) mantar tozu ve cips üretiminin optimizasyonu
Optimization of mushroom powder and chips production from the oyster mushroom (Pleurotus ostreatus)
NURCAN DOĞAN
Doktora
Türkçe
2016
Gıda MühendisliğiHarran ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İBRAHİM ABDÜLHEY HAYOĞLU
DOÇ. DR. MUSTAFA ÇAM
- D vitamini yetersizliği olan yetişkinlerde UV-C ile D vitamini içeriği zenginleştirilen mantarın biyokimyasal bulgulara etkisi
The effect of UV-C enriched mushrooms on biochemical findings in adults with vitamin D deficiency
DERAN DALBUDAK SANSAR
Doktora
Türkçe
2024
Beslenme ve Diyetetikİstanbul Okan ÜniversitesiBeslenme ve Diyetetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ AYLİN SEYLAM KÜŞÜMLER
- Hasat sonrasi putresin, salisilik asit, sitrik asit ve metil jasmonat uygulamalarinin Pleurotus ostreatus mantarinda muhafaza süresi ve kalite üzerine etkileri
Effects of post-harvest putresin, salicylic acid, citric acid and methyl jasmonate on storage time and quality in mushroom (Pleurotus ostreatus)
BİLGEHAN ŞAHİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
ZiraatBolu Abant İzzet Baysal ÜniversitesiBahçe Bitkileri Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BEYHAN KİBAR
- İstiridye mantarında farklı kurutma yöntemlerinin kalite özelliklerine etkisinin belirlenmesi
The effect of different drying methods on quality properties in the cork
MÜZEYEN GÜZEREL
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Gıda MühendisliğiOsmaniye Korkut Ata ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYŞE TÜLİN ÖZ
- Biyolojik degradasyondan kağıt hamuru endüstrisinde yararlanma
Başlık çevirisi yok
M. KEMAL YALINKILIÇ
Doktora
Türkçe
1990
Ormancılık ve Orman MühendisliğiKaradeniz Teknik ÜniversitesiOrman Endüstri Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ŞAHİN BOSTANCI