SCARA5 reseptörünün SRCR bölgesinin hesaplamalı yapısal modellenmesi ve bilgisayar temelli ilaç tasarım yöntemi kullanılarak geliştirilecek reseptör bloker'ının MCF-7 insan meme kanser hücre hattındaki sitotoksik etkilerinin in vitro araştırılması
Computational structural modelling of the SRCR region of the SCARA5 receptor and in vitro investigation of the cytotoxic effects of a receptor blocker developed by using computer-based drug design method in MFC7 human breast cancer cell line
- Tez No: 856583
- Danışmanlar: DOÇ. DR. ECE ŞİMŞEK
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 244
Özet
Bilgisayar destekli ilaç tasarımı yöntemi, hastalık sürecinde yer alan potansiyel ilaç hedeflerinin üç boyutlu yapılarını ve yeni moleküller tasarlamak için kullanır. Kanser hem gelişmiş hem de gelişmekte olan ülkeler için önemli bir sağlık sorunudur. Son on yılda araştırmacılar, kanser tedavisi için potansiyel bir alternatif yaklaşım olarak antikanser özelliklere sahip küçük peptitleri araştırmışlardır. Bu tez çalışmasındaki amaç kanserde aday terapötik hedef olan Scavenger Reseptör Sınıfı A üye 5 (SCARA5)'in ligandı L-ferritin ile olan etkileşimini inhibe edecek bir peptit tasarlanması ve bu peptitin insan meme kanser hücre hattı MCF7 üzerindeki etkisinin in vitro araştırılmasıdır. Tez çalışması in silico ve in vitro olmak üzere iki aşamadan oluşmaktadır Bu amaç doğrultusunda in silico aşamada SCARA5'in ligand bağlama bölgesi olan sisteince zengin scavenger reseptör (SRCR)'nin üç boyutlu yapısı hesaplamalı yapısal modeli ortaya çıkarıldı. X-ışını kristalografik yöntem ile sonradan ortaya çıkarılan üç boyutlu yapısı ile modellenen yapı karşılaştırıldı. Robetta_cm en uygun model olarak seçilerek ligandı olan L-Ferritin ile aralarındaki etkileşim protein-protein docking yöntemi ile ortaya çıkarıldı. Bu etkileşim bölgesindeki 16-22. aminoasit rezidüleri ile 79. aminoasit rezidüleri peptit tasarımı için hedef bölge olarak belirlendi. Tez çalışmasının in vitro aşamasında Peptitin MCF7 hücrelerinin canlılığı üzerine olan etkileri WST-1 ve Sülforodamin B testi ile belirlenmiştir. ELISA ve Western blot teknikleri ile in vitro aşama tamamlanmıştır. Peptitin MCF7 hücreleri üzerindeki yarı maksimum inhibitör konsantrasyon (IC50) değeri 188 μg/ml olarak hesaplanmıştır. Peptitin sitotoksik etkilerinin apoptoz kaynaklı olup olmadığının belirlenmesi için önemli belirteçlerden olan başlatıcı kaspaz-9 ve cellat kaspaz-7'nin protein seviyeleri ELISA testi ile saptanmıştır. Peptit dozları 2X IC50, IC50 ve 1/2X IC50 olarak belirlenmiştir. 24 saatlik inkübasyon süresi sonunda hücrelere uygulanan IC50 ve 1/2X IC50 dozlarında miktarı istatistiksel anlamda artış göstermiştir. 48 saat sonra ise 1/2X IC50 dozunda kaspaz-9 artışı görülmüştür. Kaspaz-7 miktarı açısında artış görülen doz ve saat IC50 ve 48. saatlik inkübasyon süresidir. 72 saatlik inkübasyon sonunda ise 2X IC50 uygulanan hücrelerin kaspaz-7 miktarında artış görülmüştür. Western blot sonuçlarına göre peptit 24 saatlik inkübasyondan sonra MCF7 hücrelerinde kaspaz-7 miktarını arttırırken, 48 saatlik inkübasyon sonrası kesilmiş kaspaz-7 miktarı artmıştır. Tasarlanan peptit MCF7 hücrelerinde apoptotik hücre ölümünü tetiklemiştir. ANAHTAR KELİMELER: Antikanser Peptit, İlaç Tasarımı, Kaspaz, MCF7, Moleküler Dinamik Simülasyon, Moleküler Docking
Özet (Çeviri)
The computer-aided drug design method uses three-dimensional structures of potential drug targets involved in the disease process to design new molecules. Cancer is a major health problem for both developed and developing countries. In the last decade, researchers have investigated small peptides with anticancer properties as a potential alternative approach for cancer therapy. Therefore, the aim of this thesis is to design a peptide to inhibit the interaction of Scavenger Receptor Class A member 5 (SCARA5), a candidate therapeutic target in cancer, with its ligand L-ferritin and to investigate the effect of this peptide on human breast cancer cell line MCF7 in vitro. The thesis study consists of two stages, in silico and in vitro. For this purpose, a computational structural model of the three-dimensional structure of the cysteine-rich scavenger receptor (SRCR), the ligand binding site of SCARA5, was developed in silico. The modelled structure was compared with the three-dimensional structure revealed by X-ray crystallographic method. Robetta_cm was selected as the most appropriate model and its interaction with its ligand L-Ferritin was revealed by protein-protein docking method. Amino acid residues 16-22 and 79 in this interaction region were identified as target sites for peptide design. In the in vitro stage of the thesis study, the effects of the peptide on the viability of MCF7 cells were determined by WST-1 and Sulforhodamine B assay. The in vitro stage was completed with ELISA and Western blot techniques. The peptide exhibited cytotoxic effects in MCF7 cells at different doses and incubation times. The half maximum inhibitory concentration (IC50) value of the peptide on MCF7 cells was calculated as 188 μg/ml. Protein levels of initiator caspase-9 and executioner caspase-7, which are important markers for determining whether the cytotoxic effects of the peptide are apoptosis-induced, were determined by ELISA test. Peptide doses were determined as 2X IC50, IC50 and 1/2X IC50. At the end of 24 hours incubation period, the amount of IC50 and 1/2X IC50 doses applied to the cells increased statistically. After 48 hours, an increase in caspase-9 was observed at 1/2X IC50 dose. The dose and time of increase in the amount of caspase-7 were IC50 and 48th hour incubation period. At the end of 72 hours of incubation, an increase in the amount of caspase-7 was observed in cells treated with 2X IC50. According to Western blot results, the peptide increased the amount of caspase-7 in MCF7 cells after 24 hours of incubation, while the amount of cleaved caspase-7 increased after 48 hours of incubation. The designed peptide triggered apoptotic cell death in MCF7 cells. KEYWORDS: Anticancer Peptide, Caspase, Drug Design, MCF7, Molecular Docking, Molecular Dynamic Simulation.
Benzer Tezler
- Meme kanserli hastalarda SCARA5 geninin araştırılması
Investigation of SCARA5 gene in breast cancer patients
DAMLA ÜLKER
- Scara robot tasarımı, imalatı ve uygulaması
Design production and application of Scara robot
ABDURRAHMAN DOĞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Makine MühendisliğiHarran ÜniversitesiMakine Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BÜLENT AKTAŞ
- SCARA tipi robotun yapay sinir ağları ile eğitilmesi
SCARA robot educated with artificial neural network
SELÇUK ÖZTÜRK
Yüksek Lisans
Türkçe
2007
Bilgisayar Mühendisliği Bilimleri-Bilgisayar ve KontrolSakarya ÜniversitesiMakine Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. RECEP KAZAN
- SCARA robot tabanlı kaotik karıştırıcının tasarımı ve gerçekleştirilmesi
Design and implementation of SCARA robot based chaotic mixer
DOĞUCAN YAĞMUR
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Mekatronik MühendisliğiSakarya Uygulamalı Bilimler ÜniversitesiMekatronik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ MUSTAFA ÇAĞRI KUTLU
- Scara tipi robot kolunun hareketlerinin bilgisayar destekli programlarla kontrolü
Başlık çevirisi yok
MUSTAFA ERTÜRK
Yüksek Lisans
Türkçe
1997
Makine MühendisliğiÇukurova ÜniversitesiMakine Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. NECDET GEREN