Geri Dön

Ayva polifenol oksidazının çeşitli taşıyıcılara immobilizasyonu ve karakterizasyonları

The Immobilization of polyphenol oxidase of quince in various supports and characterizations

  1. Tez No: 95318
  2. Yazar: HÜLYA YAĞAR
  3. Danışmanlar: Y.DOÇ.DR. AYTEN SAĞIROĞLU
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Kimya, Chemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2000
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Trakya Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 82

Özet

ÖZET Bu çalışmanın amacı; ayvadan (Cydonia oblonga) polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması, farklı yöntemlerle çeşitli taşıyıcılara immobilize edilmesi ve immobilize enzimlerin bazı katalitik özelliklerinin belirlenmesidir. Polifenol oksidaz enzimi yerel bir pazardan sağlanan taze ayvalardan polivinilpirolidon, askorbik asit ve Triton X-100 içeren fosfat tamponuyla homojenize edilerek ekstrakte edildi. Enzimin kısmen saflaştırılması % 30-90'lık (NH^SC^ çöktürmesi ve ardından dializ işlemi uygulanarak yapıldı. Kısmen saflaştınlmış enzim; alümina, bentonit, cam boncuklara adsorbsiyon, amberlite IRA- 900 reçinesine iyonik bağlama, CNBr ile aktive edilmiş agaroz'a kovalent bağlama, N,N'-metilenbisakrilamid ile çapraz bağlanmış poliakrilamid jele tutuklama yöntemleri ile immobilize edildi. Her immobilizasyon denemesini takiben Lowry Yöntemi ile protein tayinleri yapıldı ve immobilizasyon yüzdeleri belirlendi. Aktivite tayinleri spektrofotometrik yöntemle yapıldı. Protein ve aktivite sonuçlarına göre; alümina, bentonit, CNBr ile aktive edilmiş agaroz ve amberlite ERA-900 reçinelerinin yeterince aktif enzim bulundurdukları belirlendi ve bu immobilize enzimler için katalitik karakterizasyon çalışmaları gerçekleştirildi. Dört ayrı fenolik substrat kullanılarak her immobilize enzimin substrat spesifitesi belirlendi ve Km ve Vmax değerleri hesaplandı. Enzimin spesifik substratı olan kateşol kullanılarak optimum pH ve optimum sıcaklık çalışmaları yapıldı ve immobilize enzimler için maksimum aktivite pH:8,5-9'da, 45-50°C sıcaklıklarda görüldü, immobilize enzimlerin tekrar kullanılabilirlikleri çalışıldı ve enzimin immobilize formlarının kesikli proses için uygun olmadığı tespit edildi. Termal kararlılık çalışması gerçekleştirildi ve immobilize enzimlerin termal kararlılığa sahip oldukları belirlendi. Sistein, askorbik asit ve sodyummetabisülfit'in iki ayn konsantrasyonunda inhibisyon çalışması yapıldı, immobilize enzimlerin zamana karşı karalılıklarmı belirlemek üzere bir yıllık sürede aktivite denemeleri yapıldı ve immobilize enzimlerin depo kararlılığına sahip olduğu görüldü.

Özet (Çeviri)

n ABSTRACT The aim of this study was to purify the enzyme polyphenol oxidase from quince (Cydonia oblonga) and to immobilize the partially purified enzyme in various supports by different methods and to determine some of the catalytic characteristics of these immobilized enzymes. Polyphenol oxidase enzyme was extracted from fresh quinces, purchased from local market, by homogenizing it in phosphate buffer containing polyvinyl pyrrolidone, ascorbic acid and Triton X-100. The partial purification of the enzyme was carried out by 30-90 % ammoniumsulphate precipitation followed by dialysis. Partially purified enzyme was then immobilized by: Adsorption on alumina, bentonite, glass beads; ionic attachment to amberlite IRA-900 resin; covalent attachment to the CNBr activated agarose and; entrapment in polyacrylamide crosslinked with N,N"- methylenbisacrylamide. Following each immobilization, the protein assay was done by Lowry method and the percent of immobilization was estimated. The enzyme activity was measured spectrophotometrically. Based on the protein content and the enzyme activity, it was established that the immobilized enzyme on alumina, bentonite, CNBr activated agarose and amberlite IRA-900 resin displayed sufficient enzyme activity. Thus the catalytic characterization assays of each immobilized enzyme were performed. Using four different phenolic substrates, the substrate specificity for each immobilized enzyme was determined and the Km and Vmax values for each were calculated. The optimum pH and temperature for each of the immobilized enzymes were investigated with the specific substrate catechol. The maximum activity was observed at pH 8,5-9 and at 45-50°C. The reusability of the immobilized enzymes were studied and were found unsuitable for batch processes. The thermal stability of the immobilized enzyme were carried out, and was observed that they had thermal stability. The inhibition of the immobilized enzyme by two different concentrations of cysteine, ascorbic acid and sodiummetabisulphite were investigated. For one year period, the enzyme activity assays were done in order to establish the stability of the immobilized enzymes against time, and was found that they had storage stability.

Benzer Tezler

  1. Ayva polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Başlık çevirisi yok

    HÜLYA YAĞAR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1994

    KimyaTrakya Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    Y.DOÇ.DR. AYTEN SARIOĞLU

  2. Bitkilerden elde edilecek bazı enzimlerin tekstil proseslerinde kullanılması

    The textile applications of some enzymes plants

    AYŞE USLUOĞLU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    BiyokimyaSakarya Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. GÜLNUR ARABACI

  3. Evaluating the technical and sensory properties, antioxidant activity and bioaccessibility of phenolics in fig, apricot and quince powders

    İncir, ayva ve kayısı tozlarında teknik ve duyusal özellikler, antioksidan aktivite ve fenoliklerin biyoerişilebilirliğinin değerlendirilmesi

    SERAP KEÇECİ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    Biyomühendislikİstanbul Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMİNE ŞEKÜRE NAZLI ARDA

  4. Bazı meyve ve sebzelerdeki polifenol oksidaz enzim aktivitesi üzerine ultrason ve ultraviyole ışınlarının inhibisyon etkisinin incelenmesi

    Investigation of inhibition effects of ultrasound and ultraviolet light on polyphenol oxidase activation of some fruits and vegetables

    CEMAL BİRDAL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyokimyaAtatürk Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. HALİS ŞAKİROĞLU

  5. Bazı meyve-sebze ve atıklarının toplam fenolik madde, antioksidan özellikleri ve enzimatik esmerleşme üzerine etkilerinin incelenmesi

    Investigation of the total phenolic content, antioxidant properties and effects of some fruit-vegetables and pulp on enzymatic browning

    ZÜHAL ŞAHİN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    KimyaSakarya Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FATİH SÖNMEZ