K562 hücre hattında prime editing yöntemiyle t315ı mutasyonunun oluşturulmasına yönelik yeni moleküler yaklaşım
A novel molecular approach for the generation of the t315i mutation in the K562 cell line by prime editing
- Tez No: 963254
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ ÖZKAN BAĞCI
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Genetik, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Selçuk Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 76
Özet
Kronik Miyeloid Lösemi (KML), BCR-ABL1 füzyon proteininin sürekli tirozin kinaz aktivitesi ile karakterize edilen bir hematopoietik malignitedir ve tyrosine kinase inhibitörleri (TKI) ile tedavi edilmektedir. Ancak, TKI tedavisi sırasında bazı hastalarda direnç gelişmekte ve bu direnç sıklıkla BCR-ABL1 geninde meydana gelen nokta mutasyonlarına bağlıdır. Bu mutasyonlar, TKI bağlanmasını engelleyerek tedavi etkinliğini düşürmekte ve hastalığın progresyonunu hızlandırmaktadır. Bu tez çalışmasında, K562 hücre hattında KML'de en sık gözlenen ve TKI tedavisine direnç sağlayan T315I mutasyonu, prime editing teknolojisi kullanılarak modellenmiştir. Çalışmada iki farklı metodoloji uygulanmış olup, bunlardan biri araştırmacılar tarafından geliştirilmiş ve çift floresan marker tabanlı zenginleştirme stratejisini içermektedir. Bu yeni metodoloji, hedef hücrelerin görsel olarak izlenmesine ve direnç geni taşıyan hücrelerin seçilmesine olanak sağlayarak edit verimliliğini artırmaktadır. Elde edilen veriler, geliştirilen stratejinin önceki metodolojiye kıyasla belirgin bir edit oranı artışı sağladığını göstermektedir. Bu yöntem, KML'ye özgü mutasyonların güvenilir bir şekilde in vitro modellenmesine olanak tanırken, transfeksiyon veriminin sınırlı olduğu veya hücresel heterojenliğin yüksek olduğu sistemlerde de prime editing verimliliğini artıracak bir platform sunmaktadır. Böylece, geliştirilen metodoloji hem temel araştırmalar hem de gelecekteki fonksiyonel ve terapötik çalışmalar için değerli bir araç olarak değerlendirilebilir.
Özet (Çeviri)
Chronic Myeloid Leukemia (CML) is a hematopoietic malignancy characterized by constitutive tyrosine kinase activity of the BCR-ABL1 fusion protein and is commonly treated with tyrosine kinase inhibitors (TKIs). However, resistance to TKI therapy can develop in some patients, often due to point mutations in the BCR-ABL1 gene. These mutations hinder TKI binding, reducing treatment efficacy and accelerating disease progression. In this thesis, the T315I mutation, which is the most frequently observed mutation conferring TKI resistance in CML, was modeled in the K562 cell line using prime editing technology. Two different methodologies were applied, one of which was developed by the researchers and incorporates a dual-fluorescent marker–based enrichment strategy. This novel approach allows visual monitoring of target cells and selection of cells carrying the resistance gene, thereby enhancing editing efficiency. The results indicate that the developed strategy significantly increases the editing rate compared to the previous methodology. This approach enables reliable in vitro modeling of CML-specific mutations and provides a platform to improve prime editing efficiency in systems with limited transfection efficiency or high cellular heterogeneity. Consequently, the developed methodology represents a valuable tool for both basic research and future functional and therapeutic studies.
Benzer Tezler
- Beta talasemi majorlü hastalarda hbf indüksiyonu için genetik ve epigenetik çalışmalar
Genetic and epigenetic studies for hbf induction in patients with beta thalassemia major
YUNUS ARIKAN
Doktora
Türkçe
2016
GenetikAkdeniz ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İBRAHİM KESER
- Farklı kanser hücre hatlarında array karşılaştırmalı genomik hibridizasyon (array CGH) analizi
Array comparative genomic hybridi-zation (array CHG) analysis in di̇fferent cancer cell lines
CEYHAN PIRIL KARAHAN
- Investigation of whether PRDM1 inhibits human NK cell expansion through targeting CD25 (IL2RA)
PRDM1'in CD25 (IL2RA) aracılığıyla nNKhücrelerinin IL2 aktivasyonuna etkisinin incelenmesi
BURCU AKMAN
Doktora
İngilizce
2021
Allerji ve İmmünolojiDokuz Eylül ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. CAN KÜÇÜK
- Imatinib mesilat dirençli K562 hücre soyu ile duyarli K562 hücre soylarinda DNA Metiltransferaz 1 enziminin ifade düzeyinin karşılaştırılması
Comparison of the expression levels of DNA Methyltransferase 1 enzyme in imatinib mesylate resistant K562 cell line and sensitive K562 cell line
PARIA NOJAVAN TALATAPEH
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Genetikİstinye ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. VEYSEL SABRİ HANÇER
- Bcr/abl füzyon proteininin k562 hücre serisinde in vitro olarak immunolojik metodla akım sitometride tayini ve sonuçların rt-pcr ile karşılaştırılması
In vitro detection of bcr/abl fusion protein immunologically with flow cytometry in k562 cell line and comparison of results with rt-pcr
BİLAL AYGÜN
Tıpta Yan Dal Uzmanlık
İngilizce
2013
HematolojiBaşkent Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAKAN ÖZDOĞU