Geri Dön

CD20 pozitif B lenfoproliferatif hastalıklarda anti-CD20 (rituximab)'ın akım sitometrik olarak fonksiyonel analizi

Flow cytometric functional evaluation of anti-CD20 (rituximab) activity in CD20 positive B lymphoproliferative disorders

  1. Tez No: 123757
  2. Yazar: GÜLHİS GÜLTEKİN
  3. Danışmanlar: PROF.DR. MERAL BEKSAÇ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Hematoloji, Hematology
  6. Anahtar Kelimeler: Flow Cytometry, anti-CD20, CLL, CD55, CD59
  7. Yıl: 2002
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ankara Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 660

Özet

49 5. ÖZET: CD20 pozitif B Ienfoproliferatif hastalıklarda anti-CD20 (Rituximab)'in akım sitometrik olarak fonksiyonel analizi Akım sitometrisi, hematolojik kanser hastalıklarının tanı ve tiplendirilmesinde, hematolojik hücre farklılaşmasını evrelendirmek ve ayırt etmek amacıyla sıklıkla kullanılan bir yöntemdir. Uygun standartlar ve kontroller kullanılarak floresanlı antikor bağlı moleküllerin tam sayısının nicel olarak saptanması mümkündür. Böyle bir sayım antikor tedavisi almaya aday hastaların değerlendirilmesi açısından önemli olabilir. Örneğin; B Ienfoproliferatif hastalıkların anti-CD20 tedavisi gibi. B hücre neoplazmaları, genellikle tek bir B hücresinin immunoglobulin geninin yeniden düzenlenmesi sonucu oluşan klonal proliferasyonu ve uzun yaşam sürelerine sahip olgun görünümlü lenfositlerin birikiminin sonucu oluşur. B hücrelerin yaklaşık %90'ında CD20 antijeni eksprese edilir. Rituximab (IDEC - C2B8), CD20 molekülüne spesifik kimerik bir fare - insan monoklonal antikorudur. Rituximab, B hücreler üzerinde değişik mekanizmalarla etki etmektedir. Bu çalışmada, in vitro olarak Rituximab efflux ve kompleman aracılı sitotoksisitenin etkilerini inceledik. B Ienfoproliferatif hastalığı olan 38 tedavi almış veya tedavisiz izlenen bireyden test edilmek üzere akım sitometrisine gelmiş periferik kan ya da kemik iliği50 örnekleri ile çalışıldı. Bütün hastaların ortalama yaşlan 58 (35 - 90), ortalama lenfosit sayılan 50 x 103 / uL (2 x 103 / uL - 183 x 103 / uL) idi. Hastaların 16'sı kadın, 22' si erkekti. Bu hastaların hepsinin CD20 pozitifliği (tedavi alanlar dışında) %60'ın üzerindeydi (%65 - %98). Monoklonal antikor tedavisi alan hastalarda CD20 ekspresyon yüzdesi ortalama %20 (%1 - %57) idi. Örneklerdeki CD55 miktarı ortalama %68 (%24 - %99), CD59 miktarı ortalama %87 (%50 - %99) idi. Efflux deneyi eş zamanlı olarak iki aşamada yapıldı. Birinci aşamada sadece Rituximab ile hücre fonksiyonlarına bakıldı, ikinci aşamada ise tüplere Rituximab ile beraber hücreden madde atımını önlemek için siklosporin A (CsA) eklendi. Dört saat boyunca saat başı ve 24. saatte tüplerden alınan örnekler hem floresans ataçmanlı mikroskopta hem de akım sitometresinde incelendi. Floresans mikroskobunda yapılan incelemelerde hücrelere hem anti-CD20 (PE)'nin hem de Rituximab (FITC)'m bağlandığı görüldü. 24 saat sonunda incelenen son tüpten alman örnekte hücrelerde gerek mikroskopta gerekse akım sitometresinde antikor kaybı gözlenmedi. CsA eklenmesi Rituximab'in hücreye bağlanma oran ve miktarına ne erken ne de geç dönemde bir etki göstermemektedir. Kompleman aracılı sitotoksisitede hücre yüzeyinde yer alan kompleman etkinliğini ortadan kaldıran CD55, CD59 gibi antijenlerin varlığı engelleyici rol oynayabilir. Rituximab ve kompleman varlığında CD55 ve CD59 taşıyan B lenfositlerde hücre ölümleri geniş bir dağılım gösterdi. CD55 bulunan tüplerde hücre ölümleri ortalama %65 (%26 - %99), CD59 bulunan tüplerde hücre ölümleri ortalama %67 (%33 - %99) idi. Hücre ölümü ile CD55 ekspresyon yüzdesi arasında51 ve CD59 ekspresyon yüzdesi arasında bir korelasyon bulamadık. Sırasıyla (r = - 0.205), (r= 0.226). Yine hücre ölümü ile CD55, CD59 floresans yoğunlukları (MFI) arasında bir korelasyon bulamadık. Sırasıyla (r= - 0.132), (r=0.004). CD55, CD59 antijen ekspresyon yüzdeleri ile MFI seviyeleri arasında bir korelasyon bulamadık. Sırasıyla (r = 0,156), (r = 0.123). Hücreler üzerinde eksprese edilen CD20 miktarı arttıkça komplemana bağlı hücre ölümünün arttığını gözledik, fakat bu iki veri arasında da bir korelasyon saptanamadı (r = 0.192). CD20 miktarı düşük örneklerde kompleman varlığında veya yokluğunda, Rituximab'in hücre ölümü üzerinde herhangi bir etkisini saptayamadık..In vitro Rituximab etkilerini araştırmak için antikor efflux çalışmasının uygun bir yöntem olmadığı görüldü. CD55 ve CD59 ekspresyonları, in vitro etkinlik açısından belirleyici bulunamamıştır. B lenfoproliferatif hastalık durumunda GIP ekspresyonu, normal ve PNH olgularına göre daha yüksektir. In vivo monoklonal antikor tedavi başarısı açısından bu durumun olgularda izlenmesinde yarar vardır. Monoklonal antikor tedavisi alacak hastalarda CDC testi uygulanabilir bir yöntemdir. Ancak, hastaların çoğunun tedavi sonrası testleri yapılamadığından hasta sayısının arttırılması gerekmektedir ANAHTAR KELİMELER: Akım sitometresi, anti-CD20, KLL, CD55, CD59

Özet (Çeviri)

52 6. SUMMARY: Flow cytometric functional evaluation of anti-CD20 (Rituximab) activity in CD20 positive B lymphoproliferative disorders Flow cytometry is an accepted medical practise for evaluation and diagnose of hematological disorders, and classification and staging of hematological cell differentiation. By using appropiate standarts and controls, flow cytometry can quantitative bound fluorescent antibodies molecules. Such quantitation may be important in the evaluation of patients before an antibody based therapy, such as anti-CD20 treatment. B cell neoplasms are clonal expansions of cells derived from a single B cell with immunoglobulin gene rearrangements. CD20 is expressed in the majority of B-cell lymphomas. Rituximab (IDEC C2B8), is a chimeric monoclonal antibody containing mouse and human regions, against the B-cell spesific antigen CD20. Rituximab activity involves different mechanisms. In this study we used in vitro efflux assay and complement mediated effects on B cells. 38 peripheral blood and bone marrow samples of previously treated or newly diagnosed patients with B lymphoproliferative disorders were included. The median age of the patients were 58 (35-90), the median lymphocyte count was 50 x 103 /uL (2 x 103 /uL - 183 x 103 /uL). 16 of patients were women and 22 of them were men.53 Rituximab sensitivity test was performed on cases with CD20 expressions (except previously treated patients) more than 60% of the lymphocytes. At previously treated patients, the median of the CD20 expression was 20% (1% - 57%). The median of the CD55 expressions at the samples was 68% (24% - 99%) and the madian of the CD59 expressions was 87% (50% - 99%). Rituximab efflux test performed simultenously on the different tubes in the presence and the absence of CsA. During the 24 hours incubation period, 100 uL cell suspension taken for the analyses on flourescent attachment microscope and flow cytometry at l8^, S10^* and 24th hours. Both on the microscope and FCM, it was observed that B cells bound Rituximab and a conjugated antibody anti-CD20 without any loosing during 24 hours period. In addition of CsA, did not change the binding of Rituximab on the cells. In CDC, the presence of the antigen upregulating complement, like CD55 and CD59 on cell surface, can block its effect. CD55 and CD59 positive B lymphocytes, has shown a wide distribution cell death on the cells, with the presence of Rituximab and complement. The mean of the cell death was 65% (26% - 99%) on the CD55 positive cells and 67% (33% - 99%) on the CD59 positive cells. There was no correlation between the percentage of CD55 an CD59 expression and cell death. (Respectively r = - 0.205, r = 0.226). Also there was no correlation between MFI values of CD55 and CD59, and the cell death. (Respectively r = 0.156, r = 0.123). The cell death was increased much more depends on CD20 expression on the cells,54 but we were not able to find a correlation between those values (r = 0.192). Rituximab did not effect the cell death which contains low CD20 expressions. As a result; Rituximab efflux test is not an optimal method for the evaluation of the in vitro Rituximab effects. CD55 and CD59 expressions are not predictive for the in vitro efficiency of Rituximab. Patients with B lymphoproliferative disorders, express GIP proteins more than the normal pool and the PNH diagnosis patients. This situation may follow in the future cause of the success of the monoclonal antibody therapy. CDC is an easily applicable method for the evaluation of the efficiency of Rituximab. However, the number of patients must redound for provide more accurate results related to GIP proteins and Rituximab effects.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    576826

    Anti-CD20 monoklonal antikor içeren kemoimmunoterapi uygulanan hematolojik maligniteli hastalarda hepatit b virüs tarama verileri ve profilaksi sonuçlarının değerlendirilmesi

    The evaluation of hepatitis b virus screening data and prophylaxis results in patients with hematological malignancies receiving chemoimmunotherapy containing anti-CD20 monoclonal antibody

    AHMET EMİN ÖZTÜRK

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    Gastroenterolojiİstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AHMET EMRE EŞKAZAN

  2. Tez No

    816666

    Çocuk nefroloji pratiğinde rituksimab kullanımı ve pediatrik nefrologların yaklaşımlarını ölçmeye yönelik anket çalışması

    Use of rituksimab in pediatric nephrology practice and survey study to measure the approach of pediatric nephrologists

    AHMET ÜNAL

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıGazi Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SEVCAN AZİME BAKKALOĞLU EZGÜ

  3. Tez No

    754382

    Kliniğimizde multiple skleroz tanısı ile takip edilen ve ocrelizumab kullanan relapsing MS, primer progresif MR hastaların tedavi başlangıcından önce ve bir yıl sonraki edss skoru ve MR değişikliklerinin retrospektif değerlendirilmesi

    'relapsing MS, primary progressive ms patients followed in our clinic with the diagnosis of multiple sclerosis and using ocrelizumab, before the start of the treatment and after the start of the treatment and the retrospective research of the MR changes

    ŞERİFE ÇÖKLÜ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    NörolojiKahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi

    Nöroloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. YILMAZ İNANÇ

  4. Tez No

    670236

    Relapsing-remitting ve progresif multipl skleroz olgularında okrelizumab tedavisinin klinik ile mr görüntüleme üzerine etkinliğinin ve güvenilirliğinin retrospektif olarak değerlendirilmesi

    Retrospective evaluation of the efficiency and safety of okrelizumab treatment on clinical and mr imaging in relapsing-remitting and progressive multiple sclerosis cases

    SEDA NUR AKKAYA

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    NörolojiGazi Üniversitesi

    Nöroloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMİNE BELGİN KOÇER

  5. Tez No

    360379

    Rituksimab-CHOP kombinasyon tedavisi alan CD20 pozitif Diffüz Büyük B Hücreli Lenfoma hastalarinda prognozun belirlenmesinde R-IPI'nin retrospektif olarak standart IPI ile karşilaştirmali değerlendirilmesi

    Comparing of R-IPI and standard IPI scoring systems in patients with DLBCL

    YUSUF GÜNAYDIN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    OnkolojiGazi Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MUSTAFA BENEKLİ

Geri Dön