Dekstran bazlı hidrojellerden kalsitonin salım kinetiğinin floresans spektroskopisi ile izlenmesi
İnvestigation of release kinetics of calcitonin from dextran-based hydrogels using spectrofluorimetry
- Tez No: 142010
- Danışmanlar: PROF. M. TEVFİK ORBEY
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Eczacılık ve Farmakoloji, Pharmacy and Pharmacology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2005
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gazi Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 99
Özet
-76- 6. ÖZET Bu çalışmada, kalsitoninin kolonda salimim sağlayacak dekstran bazlı hidrojel kullanılmıştır. Dekstran polimeri epiklorobidrin ile çapraz bağlanmış ve böylece çapraz-bağlı ve biyobozunur dekstran-epiklorobidrin bidrojeli sentezlenmiştir. Hazırlanan bu dekstran hidrojelinden somon kalsitoninin (sCT) oral kontrollü salımı planlanmıştır. Doğal bir polimer olan dekstran polimeri (70.000 g/mol) epiklorobidrin ile oda sıcaklığında, 2,8 M NaOH çözeltisinde karıştırılmış ve daha sonrada bu karışım cam kalıplara (çap: 0.8 cm, yükseklik: 0.7 cm) dökülmüştür. Böylece çapraz bağlı Dekstran-ECH hidrojeli sentezîenmiştir. Bu diskler daha sonra distile suda yıkanarak oda sıcaklığında, sabit tartıma gelene kadar kurutulmuştur. Hazırlanan bu disk halindeki jellerin pH 2,0, 3.4 ve 7,4 deki şişme kinetikleri incelenmiştir. Dekstranaz enzimi varlığında, kütle kaybının zamana karşı belirlenmesi ile Dekstran-ECH hidrojelinin biyobozunurluğu gravimetrik olarak tayin edilmiştir. Miktar tayininde kullanılmak üzere, kalibrasyon çalışması yapılmış ve koşullar optimize edilmiştir. En uygun koşulun saptanmasından sonra, yapılan kalibrasyon çalışmasında doğru denklemi, F = 49,03 C + 3,72 (R2 = 0, 9955) şeklinde bulunmuştur. Türevlendirme çalışmasında ortam pH' ı borat tamponuyla 9,0' a ayarlanmıştır. Salım deneyinde kullanılacak disklere kalsitonin yüklemesi, pH 3.4 asetat tamponu içerisinde gerçekleştirilmiş ve bu amaçla 0.1 mg/mL derişiminde sCT çözeltisi kullanılrnıştır. Sabit tartıma getirilen disk halindeki jeller 6,0 mL hacmindeki sCT çözeltisine konmuş ve emdirme yoluyla asetat tamponuyla beraber sCT jel içerisine yüklenmiştir. Yükleme bittikten sonra jeller sabit tartıma-77- gelene kadar oda sıcaklığında kurutularak, salım çalışmalarında kullanılmak üzere hazır hale getirilmiştir. sCT' nin salım kinetiğinin belirlenmesi amacıyla yürütülen çalışmalar termostatı çalkalayıcıda, 50 rpm hızda ve 37 °C'de gerçekleştirilmiştir. Salım çalışmaları hem pH 3,4 asetat tamponunda hem de, pH 7,4 fosfat tamponunda yapılmıştır. Üçüncü salım çalışmasında da, sCT yüklü Dekstran-ECH diskleri 2 saat süre ile pH 2,0 fosfat tamponunda tutulmuş ve 2. saatin sonunda 3 saat süre ile tutulmak üzere pH 7,4 fosfat tamponu ortamına alınmışlardır. Son olarakta, 5. saatin sonunda dekstranaz enzimi içeren (0,7 U/ml) pH 7,0 tamponunun bulunduğu ortama nakledilmişlerdir. Salım ortamından belli aralıklarla alman sCT çözeltisi, fluoresamîn (FSM) ile türevlendirilmiştir. sCT' nin fluoresamin ile türevlendmlmesinin nedeni, yeterince florofor grubu bulunmayan sCT' ye floresans yapma özelliği kazandırmaktır. Türevlendirme işlemi, borat tamponu (pH 9.0) içerisinde gerçekleştirilmiş ve spektroflorimetre cihazı ile (A,uyarma:390 ran, ^emisyon:475 nm) ortama salman sCT miktarı tayin edilmiştir. Floresamin ile bağlı sCT' nin yaptığı emisyon, sCT derişimi ile doğru orantılı olacağından, aynı şekilde hazırlanan kalibrasyon eğrisinden faydalanarak sCT miktar tayini belli aralıklarla gerçekleştirilmiştir. Böylece yapısında bir florofor grup (tirozin) içermesine rağmen yeterli floresansı olmayan sCT" nin florimetrik yöntemle tayini gerçekleştirilmiştir. Ayrıca, sentezlenen Dekstran- ECH Mdrojelinin sCT nin kolonda salımı için uygun bir taşıyıcı sistem olduğu sonucuna varılmıştır.
Özet (Çeviri)
-78- 7. ABSTRACT In this proposed study, dextran-based hydrogels have been used for the colon-targeted delivery of salmon calcitonin (sCT). Dextran polymer has been crosslinked with the epichlorohydrin and thus crosslinked and biodegradable Dekstran-ECH hydrogel was obtained. And then, controlled release of sCT was performed by using this Dextran-ECH hydrogel. Dextran polymer which is a natural polimer (70.000 g/mol) was ccrosslinked with epichlorohydrin in 2.8 M NaOH solution in pyrex glass moulds ((diameter: 0.8 cm, height: 0.7 cm) at 10 and 23 °C. Crosslinking reactions were followed in the presence and absence of ethanol. The hydrogels prepared in disc forms were washed in distilled water and then dried at room temperature until it reached constant weight. The swelling behaviour of the polymeric discs was explored by placing the dried samples in solutions of buffers of pH 2.0, 3.4 and 7.4, respectively. Biodegradability of Dekstran-ECH hydrogel was investigated gravimetrically in the presence of dextranase enzyme. Calibration procedure was done after the optimization procedure. Standard solutions of derivatized sCT in the range of 0.5-5.0 ug/ml were used and regression equation and correlation coefficient were obtained as F=49,03 C +3,72 and R2 = 0.9955, respectively. In order to see whether derivatization reaction was achieved or not, absorption spectra were recorded using UV/VIS spectrophotometer and it was seeiL that Ihere was an absorption maximum at 390 nm conforming the derizatization.-79- In order to see whether derivatization reaction was achieved or not, absorption spectra were recorded using UV/VIS spectrophotometer and it was seen that there was an absorption maximum at 390 nm conforming the derizatization. Solutions of 0.1 mg/mL sCT were prepared using acetate buffer at pH 3.4. Previously dried polymeric discs prepared with dextran and epichlorohydrin were placed in 6.0 mL of sCT solution and by embedding, sCT was loaded in to the Dekstran-ECH discs. Finally, dried sCT loaded dextran hydrogels were ready for the release studies. Dried sCT loaded Dekstran-ECH discs were taken and placed in 10 mL acetate buffer (pH 3.4) and phosphate buffer (pH 7.4), respectively. All release studies were conducted in a shaker agitating at 50 rpm at 37 C°. At certain time intervals, the releasing medium was withdrawn and the medium was replaced with fresh buffer solution. Certain amount of fluorescamine solution was added to the sCT solution taken from the releasing medium for the purpose of derivatization. Fluorescamine was bond covalently to the sCT from the amino, NH2» group. Since sCT does not contain enough fluorofor group, we decided to derivatize it with the fluorescamine. Derivatization was conducted at borate buffer (pH 9.0). After derivatization, amount of sCT released in the medium was determined with the spectrofluorimeter (Ex:390 nm, Em=475 nm). Because emission from the derivatized sCT was directly propotional to the concentration of derivatized sCT, with the help of standard solutions of derivatized sCT, quantitative determination of sCT was conducted. As a result, it was "seen that Dekstran-ECH hydrogel was a suitable colon- targeted drug delivery system for the controlled release of solmon calcitonin in the colon and also quantitative determination of calcitonin in the releasing medium-80- was performed with the help of derizatization using spectrofluorimeter althought k did not contain enough number of fluorofor group rather than tyrosine.
Benzer Tezler
- Biyobozunur ve/veya pH-duyarlı dekstran hidrojellerin sentezi, karakterizasyonu ve kolon-spesifik ilaç salımındaki kullanımları
Biodegradable and/or pH-senstitive dextran hydrogels: Synthesis, characterization and application in colon-specific
DİLEK İMREN
Doktora
Türkçe
2003
Kimya MühendisliğiHacettepe ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MENEMŞE GÜMÜŞDERELİOĞLU
PROF. DR. ALİ GÜNER
- Polisakkarit bazlı taşıyıcılardan neovaskülerizasyon ajanlarının kontrollü salımının in-vitro ve in-vivo koşullarda incelenmesi
Controlled release of neovascularization agents incorporated with polysaccharide based carriers in-vitro and in-vivo
ALPER KEMAL DOĞAN
- Rational design and applications of advanced functional polymer gels
İleri fonksiyonel polimer jellerin rasyonel tasarımı ve uygulamaları
MERTCAN ER
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
Kimyaİstanbul Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NERMİN ORAKDÖĞEN
- Dekstran hidrojellerin enzimatik bozunma kinetiğinin enstrümental tekniklerle incelenmesi
Investigation of enzymatic degradation kinetics of dextran hydrogels by instrumantal techniques
MURAT ŞİMŞEK
Yüksek Lisans
Türkçe
2004
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MENEMŞE GÜMÜŞDERELİOĞLU
- Farklı çapraz bağlayıcılarla hazırlanmış poliakrilamit ve poli(2-hidroksietil metakrilat) hidrojellerinin sentezi ve karakterizasyonu
Synthesis and characterization of poly(acrylamide) and poly(2-hydroxyethyl methacrylate) hydrogels prepared with different crosslinkers
MEZİYET ÇETİK ERKOL
Yüksek Lisans
İngilizce
2010
KimyaÇanakkale Onsekiz Mart ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. SEMA EKİCİ