P60-katanin cloning and expression
P60-katanın'in klonlanması ve ekspresyonu
- Tez No: 166408
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. ARZU KARABAY KORKMAZ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2005
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İstanbul Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 68
Özet
P60-KATANİN'İN KLONLAMASI VE EKSPRESYONU ÖZET Katanin mikrotûbülleri parçalayan bir proteindir. 60 ve 80 kDa'lvık polipeptidlerden oluşan bu heterodimerik protein, stabil mikrotûbülleri parçalayabilmek için ATPye ihtiyaç duyar. Kataninin biyolojik rolüne gelince, bu proteinin mitozda önemlidir. Katanin, mitozda mikrotübüllerin eksi uçlarının bağlı oldukları sentrozomlardan aynlmasma aracı olmaktadır ve böylece mikrotübüllere bağlanmış olan kromozomlann akışı sağlanmaktadır. Mikrotübüllerin sentrozomlardan ayrılması sinir hücrelerinde çok önemlidir. Serbest mikrotübüller uzayan aksonlara taşınmaktadır ve burada akson için gerekli olan fiziksel desteği sağlamaktadırlar. Mikrotübüllerin diğer bir görevi de organellerin taşınmasında sübstrat vazifesi görmektir. Katanin iki alt üniteden oluşmaktadır, onların isimleri moleküler ağırlıklarına göre belirlenmiştir. Kataninin alt ünitelerinin araştırılması bu enzimin aktivitesinin ve rollerinin daha iyi anlaşılmasını sağlayacaktır. p80 ve p60 antikorları bu araştırmalarda kullanılacaktır. Monoklonal antikor poliklonal antikora tercih edilmektedir, çünkü monoklonal antikor neredeyse bitmeyen bir antikor kaynağıdır ve tek bir epitop tanıyabilme özelliğine sahiptir. pöO'ın ekspresyonu gerçekleştirilmiş olmasına rağmen, protein çözünmüş halde elde edilememiştir. Bu durum monoklonal antikor üretimini zorlaştırmaktadır. Bu çalışmada küçük (600 kb) özel bir p60-katanin kısmı ekspresyon vektörüne klonlanarak ekspresyonu gerçekleştirildi. Ekspres edilen protein çözünmüş halinde bulunmaktadır. Sonuçta üretilen çözünmüş protein immobilize metal afînite kromatografisi yöntemiyle doğal şartlar altmda saflaştınldı. Bu projenin sonraki aşamalarında da rekombinant p60-katanini kullanılarak monoklonal antikor üretilecektir. Üretilen antikorun p60 katanin inhibisyonu, pöO'kataninin ekspresyonunun ve lokalizasyonun in vivo gözlenmesi gibi pek çok geniş kullanım alam olacaktır. Bu çalışmalar mikrotübüller ve kataninle ilgili hastalıklarımn anlaşılabilmesini sağlayacaktır ve hatta belki uzun vadede bu hastalıkların iyileştirilmesinde kullanılacaktır. vıııı
Özet (Çeviri)
P60-KATANIN CLONING AND EXPRESSION SUMMARY Katanin is a microtubule severing protein. This heterodymeric protein (60 and 80kDa polypeptides) requires ATP to sever and disassemble stable microtubules. Katanin is important in mitosis, it mediates the disassembly of microtubule minus ends during poleward flux. Release of microtubules from centrosome is also essential in neuronal cells. Released microtubules are transported into growing axons where they provide architectural support and a substrate along which organelles are transported in both directions within the axon. Katanin consists of two subunits: p60 and p80 which were named according to their molecular weight. Studies of katanin' s subunits would enable us to understand activity and roles of katanin better. Antibodies against p80 and p60 will be used in these studies. Monoclonal antibodies are preferred against polyclonal antibodies since they are an almost infinite source of antibodies and recognize one single epitope. However, expression experiments with p60 resulted in an insoluble protein until now and this hinders production of monoclonal antibody. In this study a short specific sequence (600 kb) of p60-katanin was expressed after being cloned into expression vector. Expressed protein is found in the soluble fraction. Finally, soluble protein was purified using metal affinity chromatography under native conditions. The next step will be to produce monoclonal antibody using recombinant p60-katanin. Produced antibody will have wide application area e.g. inhibition of p60 subunit, observation of p60 in vivo expression and localization which will help to understand human disorders related to microtubules and katanin, and maybe eventually even will be even used to treat them. 1X1
Benzer Tezler
- Identification of interaction between septin3 and p60-katanin (KATNA1) proteins
Septin3 ve p60-katanin (KATNA1) proteinlerinin etkileşiminin aydınlatılması
BURCU SUCU
Yüksek Lisans
İngilizce
2017
Genetikİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ARZU KARABAY KORKMAZ
- p60-katanin (katna1) gene promoter regulatıon by ELK1
p60-katanin (KATNA1) gen promotörünün ELK1 ile regülasyonu
DOLUNAY KELLE
Yüksek Lisans
İngilizce
2017
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ARZU KARABAY KORKMAZ
- Production and characterization of monoclonal antibody against p60-katanin
P60-katanin?e karşı monoklonal antikor üretilmesi ve karakterizasyonu
MERAY AKKOR
Doktora
İngilizce
2011
Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ARZU KARABAY KORKMAZ
- MikroRNA miR-124-3P'nin P60-katanin ifadesi üzerindeki olası regülasyonunun aydınlatılması
Illumination of the possible regulation of microRNA miR-124-3P on P60-katanin expression
BEYZA ÖKÇECİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Moleküler TıpMuğla Sıtkı Koçman ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYŞEGÜL YILDIZ
- Transkripsiyon faktörü p53 tümör supressör proteininin p60-katanin (KATNA1) promotoru ile etkileşimi
Interaction between transcription factor p53 tumor suppressor and p60-katanin (KATNA1) promoter
MEHTAP KAYA
Yüksek Lisans
İngilizce
2015
Genetikİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ARZU KARABAY KORKMAZ