SIK2 involvement in downregulation of FGF signaling through GAB1 and RAF-1
SIK2?nin GAB1 ve RAF-1 üzerinden FGF sinyal yolağının negatif regülasyonuna katılımı
- Tez No: 297821
- Danışmanlar: PROF. DR. KUYAŞ BUĞRA BİLGE
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2011
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 93
Özet
Müller hücrelerinin FGF2'ye karşı proliferasyon cevabı Ras/MAPK yolağı üzerinden, hızlı ve geçici ERK 1/2 aktivasyonu ile oluşturulmaktadır. Laboratuvarımızdan çıkan sonuçlar SIK2'nin, yolak elemanlarından Gab1 ve Raf-1 proteinlerini sırasıyla Ser266 ve Ser621 üzerinden fosforlaması ile FGF2 yolağını regüle ettiğini düşündürmektedir. Negatif regülasyon sürecinde gerçekleşecek olayların aktivasyonu için bu fosforlanmaların bağlanma partnerleri ile olan etkileşimleri engellediğini önermekteyiz.Bu hipotezi doğrulamak adına bu çalışma kapsamında, in vitro mutagenez yöntemi ile Gab1 üzerindeki Ser266 ve Raf-1 üzerindeki Ser621 amino asitleri alanine dönüştürülmüştür. 621. serin amino asidinin otofosfarilasyon noktası olması nedeniyle, Raf-1 proteini kinaz inaktif kılınmıştır. HEK293T hücrelerinde anlatımları sağlanan yabanıl ve mutant proteinler, in vitro kinaz deneyinde kullanılmak üzere immünçökeltme yöntemi ile izole edilmiştir. İn vitro kinaz deneyinden elde edilen sonuçlar bu mutasyonların SIK2 tarafından gerçekleştirilen fosforilasyonları engellediğini göstermiştir, böylece SIK2'nin bu serin amino asitlerini hedef aldığı doğrulanmıştır. Bağlanma partnerleri ile beraber immünçökeltme çalışmaları S266A mutasyonunun FGF uyarımına bağlı Gab1-Shp2 etkileşimini arttığına işaret ederken, Gab1-Grb2 etkileşiminde ise belirgin bir fark görülmemiştir. Bu veriler, SIK2 tarafından gerçekleştirilen Ser266 fosforlanmasının Gab1 proteininin Shp2'ye geçici bağlanmasında önemli olduğu ve FGF'e bağlı ERK aktivasyonunu regüle ettiği düşündürmektedir. Bu mutasyonun MIO-M1 hücrelerinin FGF'e bağlı proliferasyonunu bir miktar arttırdığı görülmüştür.Verilerimiz SIK2'nin FGF2 yolağını Gab1 ve Raf-1 proteinlerini, sırasıyla Ser266 ve Ser621 üzerinden fosforlaması ile regüle ettiği önerisini desteklemektedir.
Özet (Çeviri)
Proliferative response of Müller cells to FGF2 is propagated via Ras/MAPK pathway, and involves rapid and transient ERK1/2 activation. Results from our laboratory implicate SIK2 in the regulation of FGF2 signaling via serine/threonine phosphorylation of pathway elements Gab1 and Raf1, on Ser266 and Ser621 respectively. We propose that these phosphorylations hamper interaction with the partners to activate downstream events.In this study to test the hypothesis, Ser266 on Gab1 and Ser621 on Raf-1 were mutated to alanine via site-directed mutagenesis. As Ser621 has been described as an autophosphorylation site, Raf-1 was also rendered kinase inactive. Wild type and mutant proteins expressed in HEK 293T cells were purified by immunoprecipitation and were used for in vitro kinase assay. Results obtained from in vitro kinase assays indicated that the mutations obliterated the phosphorylation by SIK2, thus verified that SIK2 targets these serine residues. Co-immunoprecipitation studies revealed that S266A mutation increases FGF dependent Gab1-Shp2 binding, no differences were evident in Grb2-Gab1 interaction. Therefore, it is conceivable that the Ser266 phosphorylation by SIK2 is important in transient nature of Gab1 interaction with Shp2 and might regulate FGF-dependent ERK activation. The mutation led to modest enhancement of FGF dependent proliferation in MIO-M1 cells.
Benzer Tezler
- Involvement of SIK2 in FGF2 signal regulation via Raf-1 & generation of mutants for identification of phosphorylation sites on SIK2 by Erk
SIK2 proteininin Raf-1 proteini araciliğiyla FGF2 sinyal yönetimindeki görevi & SIK2 proteininin Erk proteini tarafindan fosforlanma motiflerinin belirlenmesi için mutant üretimi
ÖZDEN AKAY
Yüksek Lisans
İngilizce
2012
Bilim ve TeknolojiBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. KUYAS BUGRA BİLGE
- The possible involvement of SIK2 in diabetic retinopathy
SIK2'nin diyabetik retinopati'deki olası rolü
BURCU ERSOY
Yüksek Lisans
İngilizce
2015
BiyolojiBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. KOYAŞ BİLGE
- ER stres SIK2 etkileşiminin insan öncül yağ hücrelerinin liporsama (Lisa-2) farklılaşmasına etkisi
ER stress with SIK2 interaction of effects on differentation of human preadipocytes (Lisa-2)
TUĞÇE KESKİNER
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
BiyolojiGebze Yüksek Teknoloji EnstitüsüMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FERRUH ÖZCAN
- SIK3 involvement in FGF2 signaling in müller cells
SIK3'ün müller hücrelerinde FGF2 sinyal iletimine katılımı
YILDIZ KOCA
Yüksek Lisans
İngilizce
2013
BiyokimyaBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KUYAŞ BUĞRA BİLGE
- The effects of VEGF-C and SIK2 on polarization and recruitment of macrophages
VEGF-C ve SIK2'nin makrofaj polarizasyonu ve birikimine etkileri
HAMZA FURKAN ALKAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2014
GenetikGebze Yüksek Teknoloji EnstitüsüMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FERRUH ÖZCAN