Geri Dön

Kiwano (Cucumis metuliferus) bitkisinde peroksidaz enzimlerinin kinetik özelliklerinin incelenmesi

Kinetic properties of some peroxidases from kiwano (Cucumis metuliferus)

PDF İndir

  1. Tez No: 337010
  2. Yazar: ZEYNEP DENLİ
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. GÜLNUR ARABACI
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Kimya, Biochemistry, Chemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Peroksidaz /askorbat peroksidaz, kiwano, Cucumis metuliferus, NATİVE / SDS-PAGE, üçlü-faz ayırma tekniği (TPP), Peroxidase/Ascorbate peroxidase, kiwano, Cucumis metuliferus, Native / SDS-PAGE, three phase partitioning (TPP)
  7. Yıl: 2013
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Sakarya Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 134

Özet

Bu çalışmada, Cucumis metuliferus (kiwano) bitkisinden elde edilen Peroksidaz (POD) ve Askorbat peroksidaz (APX) enzimlerinin kinetik özellikleri incelenmiştir. POD üçlü-faz ayırma tekniği (TPP) ve diyaliz işlemleri ile kısmen saflaştırılmıştır. SDS-PAGE ve Native PAGE yöntemleriyle saflık kontrolü yapılmıştır. Ham enzim kullanılan karakterizasyon çalışmalarında 4-metil katekol, ABTS, guaiakol, kafeik asit, o-dianisidin, o-fenilen diamin, progallol, katekol, gallik asit ve H?O? substratları kullanılmıştır. Her bir substrat için Michaelis-Menten sabiti (KM) ve maksimum reaksiyon hızı (Vmax) hesaplanmıştır. Kafeik asit en yüksek substrat spesifikliğine sahiptir. Enziminin optimum pH?sı 4,0?7,5 arasında ve optimum sıcaklığı ise 30 ? 40 ? arasında bulunmuştur. Kiwano POD enzimini NaN3, tiyoüre, KCN, L-Sistein, EDTA, SDS, Triton X-100 ve L-Glutatyon, Zn+2, Mg+2, Fe+2, Pb+2, Sn+2 metalleri, metanol, DMSO, aseton, etanol, 1-bütanol, 2-propanol, kloroform ve etil asetat organik çözücüleri inhibe etmektedir. Pek çok POD enzimini 2- merkapto etanol inhibe ederken kiwano POD enzimini inhibe etmemiştir. Bazı aminoasitlerin POD enzimi üzerine etkisi incelendiğinde L-histidin en yüksek aktivasyona, L-prolin en yüksek inhibisyona sebep olmuştur. POD optimum iyonik şiddeti NaCl? ün 4 mM konsantrasyonunda çıkmıştır. Yapılan POD depolama kararlılığı sonucuna göre; oda sıcaklığında dört yüz saat sonrasında enzim aktivitesi %84, +4 oC? de altmış günün sonrasında 83%, -20 oC? de yüz otuz beş gün sonrasında % 73 oranında azalmıştır. Kiwano askorbat peroksidaz (APX) enziminin maksimum aktivite gösterdiği optimum pH ve sıcaklık değerleri sırasıyla 6,2 ve 30 oC olarak bulunmuştur. Kiwano APX enzim kinetiğinden elde edilen sonuçlara göre; KM ve Vmax değerleri sırasıyla askorbik asit için 284.80 µM, 0.0035 EÜ/dk. H2O2 için 64.90 µM, 0,0077 EÜ/dk. olarak bulunmuştur. Kiwano APX üzerine NaN3, KCN, 2-merkapto etanol, L-sistein, EDTA, iyodoacetamid, 2-nitrobenzoik asit ve L-glutatyon?nun inhibisyon etkisi incelendiğinde L-Glutatyon ve EDTA hariç hepsinin inhibisyon etkiye sahip olduğu bulunmuştur. Metal iyonlarının APX aktivitesi üzerine etkisi sonucuna göre Fe+2, Cu+2, Ba+2 metallerinin bazı konsantrasyonlarında aktivasyona sebep olurken, diğer metaller inhibisyona sebep olmuştur. APX enzimi üzerine amino asit etkisi çalışmasında; L-prolin en iyi aktivatör olarak, L-glutamik asit ise en etkili inhibitör olarak görev yapmaktadır.

Özet (Çeviri)

In this work, it is investigated the kinetic properties of peroxidase (POD) and ascobate peroxidase (APX) obtained from Cucumis metuliferus (kiwano). POD was partially purified by using Three Phases Partitioning (TPP) and dialysis. The purification of POD was detected by SDS-PAGE and Native PAGE. 4-methylcatechol, ABTS, guaiacol, caffeic acid, o-dianisidine, o-phenylenediamine, pyrogallol, catechol, gallic acid and H?O? substrates were used in the characterization studies of crude enzyme extract. Michaelis-Menten constant (KM) and maximum reaction velocity (Vmax) were calculated for each substrate. Cafeic acid has the maximum substrate specifity. POD?s optimum pH and temperature were found between 4,0-7,5 and 30-40 ?, respectively. POD activity was inhibited from NaN3, thiourea, KCN, L-cysteine, EDTA, SDS, Triton X-100 and L-glutathione, Zn+2, Mg+2, Fe+2, Pb+2, Sn+2 metal ions, methanol, DMSO, acetone, ethanol, 1-butanol, 2-propanol, chloroform and ethyl acetate. 2-mercaptoethanol acts as an inhibitor for many PODs, but not for kiwano POD. When the effect of some amino acids on the POD was investigated, L-histidine led to maximum activation and L-Proline maximum inhibition. Optimum ionic strength of POD was found in 4 mM of NaCl. As a result of enzyme storage stability, the POD activity decreased %84 at the room temperature after 400 hours, 83% at +4 oC after 60 days and % 73 at -20 oC after 135 days. The optimum pH and temperature that ascorbate peroxidase (APX) has maximum activity were obtained as 6,2 and 30 oC, respectively. In the results of APX kinetics, the KM and Vmax values were found as for ascorbic acid 284.80 µM, 0.0035 EU/min. and for H2O2 64.90 µM, 0,0077 EU/min., respectively. When it is searched the inhibitory effect of NaN3, KCN, 2-mercaptoethanol, L-cysteine, EDTA, iodoacetamide, 2-nitrobenzoic acid and L-glutathione on the APX, all of them except L-glutathione and EDTA caused to inhibition. As a result of some metal ions effect on APX activity, whereas Fe+2, Cu+2 and Ba+2 metal ions lead to activation in the some concentrations of them, other metals lead to inhibition. In the study of the amino acid effect on the APX; while L-proline acts as the best activator, L-glutamic acid acts as the most effective inhibitor.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    169036

    Bazı doğum kontrol ilaçlarının paraoksonaz, katalaz ve karbonik anhidraz enzim aktiviteleri üzerine in vivo etkilerinin araştırılması

    Investigations of the in vivo effects of some contraceptives on paraoxonase, catalase and carbonic anhydrase enzyme activities

    SELDA KIRANOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2005

    KimyaBalıkesir Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. OKTAY ARSLAN

  2. Tez No

    773843

    Domestication procedures in Arabic translations of Alice's Adventures in Wonderland

    Alice Harikalar Diyarında'nın Arapça çevirilerinde yerlileştirme stratejileri

    HUDHAİFA BASIL DAHHAM AL-NUAIMI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    Mütercim-TercümanlıkAtılım Üniversitesi

    Mütercim Tercümanlık Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET HAKKI SUÇİN

  3. Tez No

    824453

    The role of fear of negative evaluation and native speaker presence in foreign/second language production and classroom participation

    Negatif eleştiri korkusu ve ana dili İngilizce olan kişilerin varlığının yabancı/ikinci dil kullanımı ve sınıf katilimi üzerindeki rolü

    TUBA YILMAZ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2014

    Eğitim ve ÖğretimUniversity of Florida

    Eğitim Programları ve Öğretimi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ESTER DE JONG

  4. Tez No

    649604

    Bilgisayar teknolojisi etkisinde plastik sanatlar

    Plastic arts under the effect of computer technology

    AHMET EMRE SÖZEN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    Güzel SanatlarTekirdağ Namık Kemal Üniversitesi

    Resim Ana Sanat Dalı

    PROF. MELİHAT TÜZÜN

  5. Tez No

    863375

    Görmenin teknik aracı olarak yeni medya ve resim sanatı ilişkisi

    The relationship between new media and painting as a technical tool of viewing

    İBRAHİM TOKASLAN

    Sanatta Yeterlik

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Güzel SanatlarÇukurova Üniversitesi

    Sanat ve Tasarım Ana Sanat Dalı

    PROF. DR. NİMET KESER

Geri Dön