Purification and characterization of two fractions of cytochrome b5 from sheep lung
İki sitokrom b5 franksiyonunun koyun akciğerinden saflaştırılması ve karekterizasyonu
- Tez No: 35730
- Danışmanlar: PROF. DR. EMEL ARINÇ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: îki Farklı b5 Fraksiyonunun Saflaştırılması, Koyun Akciğeri, Kinetik Özellikler, HPLC ile peptit Haritalaması, Purification of Two Different Fractions of Cytochrome b5, Sheep Lung, Kinetic Properties, Peptide Maping by HPLC
- Yıl: 1994
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 317
Özet
ÖZ İKİ SİTOKROMb5 FRAKSİYONUNUN KOYUN AKCİ?ERİNDEN SAFLAŞTIRILMASI VE KARAKTERİZASYONU BAŞARAN Nilay Doktora Tezi, Biyokimya Anabilim Dalı Tez Yöneticisi: Prof. Dr Emel ARINÇ Yardımcı Tez Yöneticisi: Doç. Dr. Orhan ADALI Haziran, 1994, 145 sayfa Koyun Akciğer sitokrom b5'i deterjan ile çözünürleştirilmiş mikrozomlardan arka arkaya üç DEAE-selülöz kolunu ve son olarakta Sephadex G- 100 ve G-200 kolunu kullanılarak saflaştınldı. Tavşan karaciğer sitokrom b5 i de akciğer sitokrom b5 i için kullanılan yöntemler kullanılarak saflaştınldı, sadece son basamak olarak Sephadex G-75 veya G-100 kolunu kullanıldı. Saflaştırma işlemi, her bir dokuda, iki ayrı sitokrom b5 fraksiyonunun elde edilmesiyle sonuçlandı. Koyun akciğerinden ve tavşan karaciğerinden saflaştırılan sitokrom b5 fraksiyonlarının özgül miktarları, koyun akciğer sitokrom b5 fraksiyon 1 ve 2 için 27.2 ve 43.8 nmole/mg protein, tavşan karaciğer fraksiyon 1 ve 2 için 35 ve 55 nmole/ mg protein olarak bulundu. Her iki saflaştırılmış koyun akciğer ve tavşan karaciğer sitokrom b5 fraksiyonları SDS poliakrilamid jel elektroforezine uygulandığında aynı elektroforetik profiller göstererek tek protein bandı verdi ve her bir sitokrom b5 fraksiyonunun monomer molekül ağırlığı 16400±500 olarak bulundu.Akciğer ve karaciğer sitokrom b5 fraksiyon 1 ve fraksiyon 2 nin oksitlenmiş ve indirgenmiş formları benzer spektral özellikler gösterdi. Saflaştınlmış tavşan karaciğer ve koyun akciğer sitokrom b5 fraksiyonlarının elektronları NADH sitokrom b5 redüktazdan sitokrom c'ye taşıma özelliği çalışıldı ve, Km ve Vmax değerleri bulundu. Km değerleri sırası ile tavşan karaciğer sitokrom b5 fraksiyon 1 ve 2 için 0.033|iM ve 0.076|iM, koyun akciğer sitokrom b5 fraksiyon 1 ve 2 için 0.076 fiM, 0.055U.M olarak bulundu. Vmax değerleri ise sırası ile tavşan karaciğer sitokrom b5 fraksiyon 1 ve 2 İçin 1639, 1275 (iM/min/ml ve koyun akciğer fraksiyon 1 ve 2 için 714, 839.6 (j.M/min/ml olarak hesaplanmıştır. Saflaştınlmış sitokrom b5 kullanılarak immunize edilmiş tavşanlardan elde edilen 0.2 ve 0.4 mg antikorun NADH sitokrom b5 redüktazın ve sitokrom b5 e bağımlı akciğer sitokrom c redüktaz aktivitesini %20 ve %47 oranında inhibe ettiği bulunmuştur. Tripsin, kimotripsin ve papain kullanılarak kınlan akciğer ve karaciğer apositokrom b5 fraksiyon 1 ve fraksiyon 2 'nin peptitleri HPLC ile analiz edildiğinde elde edilen peptit haritalannda belirli farklılıklar gözlendi. Bu da sitokrom b5 fraksiyonlannın pirimer yapılannda bazı farklılıklar olduğunu göstermektedir.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF TWO FRACTIONS OF CYTOCHROME b5 FROM SHEEP LUNG BAŞARAN, Nilay Doctor of Philosophy in Biochemistry Supervisor: Prof. Dr. Emel ARINÇ Co-supervisor: Assoc. Prof. Dr.Orhan ADALI June, 1994, 145 pages Sheep lung cytochrome b5 was purified from detergent solubilized microsomes by chromatography on three succesive DEAE-cellulose columns and a final Sephadex G-100 and G-200 columns. Rabbit liver cytochrome b5 was purified also by the same procedure used for the purification of lung cytochrome b5 except that the Sephadex G-75 or G-100 was used as a final step. The purification procedures resulted in two separate fractions of cytochrome b5 from each source. The specific contents calculated from the final preparations were 27.2 and 43.8 nmole/mg protein for sheep lung cytochrome b5 fraction 1 and fraction 2 and 35 and 55 nmole/mg protein for rabbit liver fraction 1 and fraction 2 respectively. Two fractions of sheep lung and rabbit liver cytochrome b5 exhibited identical electrophoretic patterns when subjected to SDS-PAGE Each purified sheep lung and rabbit liver cytochrome b5 fractions gave one protein band with monomer molecular weight of 16400±500 on SDS-PAGE. IllThe examinations of reduced and oxidized forms of lung and liver cytochrome b5 fraction 1 and fraction 2 showed similar spectral properties. The ability of the purified rabbit liver and sheep lung cytochrome b5 fractions to transfer the electrons from NADH-cytochrome b5 reductase to cytochrome c was investigated and Km and Vmax values were determined. Apparent Km values were determined to be 0.033 uM and 0.076uM for rabbit liver cytochrome b5 fraction 1 and fraction 2, 0.076 uM and 0.055uM for sheep lung fraction 1 and fraction 2 respectively and Vmax values were calculated as 1639 and 1275 |iM/min/ml, for rabbit liver fraction 1 and fraction 2, 714 and 839.6 ]iM/min/ml for sheep lung cytochrome b5 fraction 1, and fraction 2 respectively. 0.2 mg and 0.4 mg antibody (anti-rabbit liver b5) obtained from immunized rabbit using purified cytochrome b5, inhibited the NADH-cytochrome b5 reductase and cytochrome b5 dependent lung cytochrome c reductase activity about 20 % and 47 % respectively. The peptides of liver and lung apocytochrome b5 fractions 1 and 2 obtained by trypsin, chymotrypsin and papain cleavage gave different patterns when analized by HPLC. This indicates some differences in the primary structures of those cytochrome b5 fractions.
Benzer Tezler
- Isolation and characterization of two forms of soluble NADH cytochrome b5 reductase from human erythrocytes
Başlık çevirisi yok
ADİLE ŞAPLAKOĞLU(UMAY)
- Purification and characterization of cytochrome P4501A1 and cytochrome P450 reductase from feral leaping mullet (Liza salines) liver microsoms
Sitokrom P4501A1 ve P450 redüktazın doğal kefal balığı karaciğerinden saflaştırılması ve karakterizasyonu
ALAATTİN ŞEN
Doktora
İngilizce
1997
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EMEL ARINÇ
- Hindi Karaciğerinden NADPH-Sitokrom P450 Redüktaz Enziminin Saflaştırılması, Karakterizasyonu ve Bazı Kimyasal Maddelerin Enzim Aktivitesi Üzerine Etkilerinin İncelenmesi
Purification and Characterization of NADPH Cytochrome P450 Reductase Enzyme from Turkey Liver and Investigation of The Effects of Some Chemical Substances on Enzyme Activity
EBRU AKKEMİK
- Partial purification and biochemical characterization of B-Lactamase from penicillin G resistant strains of streeptococcus thermophilus
Penisillin G'ye dayanıklı streptococcus thermophilus susundan elde edilen B-Laktamazin kısmi saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu
LAURA-CRİSTİNA CHIRICA
- Analysis and characterization of the Pichia pastoris secretome for pharmaceutical protein production
Pichia pastoris sekretomunun farmasötik protein üretimi için analizi ve karakterizasyonu
HATİCE PINAR KIRLI
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ HARUN KOKU
PROF. DR. PINAR ÇALIK
