Glutatyon-S-transferaz enziminin epiklorohidrin ara kolu üzerinden magnetik demir nanopartiküllere kovalent immobilizasyonu ve karakterizasyonu
Covalent immobilization and characterization of glutathi̇one-S-transferaze enzymes on to magneti̇c i̇ron nanoparti̇cles vi̇a epichlorohydrin i̇ntermedi̇ate spacer arm
- Tez No: 394614
- Danışmanlar: PROF. DR. RAMAZAN BİLGİN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2015
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Çukurova Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 89
Özet
Bu çalışmada, Fe3O4 magnetik nanopartiküllerin sentezi ve glutatyon-S-transferaz enziminin Fe3O4 magnetik nanopartiküllere epikolorohidrin ara kolu üzerinden kovalent olarak immobilizasyonunun araştırılması, serbest ve immobilize enzimlerin maksimum aktivite gösterdiği koşulların (pH ve sıcaklık), kinetik parametrelerinin (Km, Vmax, Termal ve Depolama kararlılıkları) ve immobilize edilen glutatyon-S-transferazın (GST) tekrar kullanılabilirlikleri araştırılmıştır. Serbest ve immobilize enzimler için optimum pH değerleri sırasıyla 7,0 ve 6,0 olduğu belirlenmiştir. Ayrıca serbest ve immobilize enzimlerin optimum sıcaklıkları sırasıyla 37 ve 40 °C olarak ölçülmüştür. Optimum koşullarda, serbest GST enziminin glutatyon(GSH) substratı için Vmax değeri 204,8 U/mg prot ., CDNB substratı için Vmax değeri 194,3 U/mg prot. olarak ölçülmüştür. İmmobilize GST enziminin glutatyon(GSH) substratı için Vmax değeri 33,08 U/mg prot ., CDNB substratı için Vmax değeri 33,29 U/mg prot. olarak ölçülmüştür. Serbest GST enziminin glutatyon(GSH) substratı için Km değerleri sırasıyla 0,1873 mM , CDNB substratı için 0,201 mM olarak, immobilize edilen GST enziminin glutatyon(GSH) substratı için Km değerleri 0,3042 mM, CDNB substratı için 0,2523 mM olarak hesaplanmıştır. Serbest ve immobilize GST enziminin farklı sıcaklıklarda belirlenen termal kararlılıkları karşılaştırılmıştır. Tekrar kullanılabilirliği araştırılmış ve 20 kullanımdan sonra immobilize enzimler için aktivitesinin %50 (ECH)'ini koruduğu belirlenmiştir. Serbest GST enzimi, 4 °C'de ve 25 °C'de 30 gün depolanma süresi sonunda başlangıç aktivitelerinin sırasıyla %32 ve %18'ini koruduğu belirlenmiştir. İmmobilize enzimler için 4°C'de ve 25 °C'de 30 gün depolanma süresi sonunda sırasıyla başlangıç aktivitesinin %41 ve %20'sini koruduğu tespit edilmiştir.
Özet (Çeviri)
In this study ,the synthesis of Fe3O4 magnetic nanoparticles and covalent immobilization of glutathione-S-transferase onto Fe3O4 magnetic nanoparticles via epikolorohydrin spacer arm, the determination of optimal reaction conditions of free and immobilized enzymes and the reusability of immobilized enzyme were investigated. The optimum pH values for free and immobilized enzymes were determined to be 7.0 and 6.0 , respectively. Also the optimum temperature of free and immobilized enzyme were measured as 37 and 40 °C , respectively. Under the optimum conditions, the values of Vmax for glutathione (GSH) and CDNB substrates of free GST enzyme that were measured as 204,8 U/mg prot., and 194,3 U/mg prot. The values of Vmax for the glutathione (GSH) and CDNB substrates of immobilized GST enzyme that were measured as 33,08 U/mg prot., and 33,29 U/mg prot. For the Km values of glutathione and CDNB substrates of free GST enzyme were 0,1873 mM and 0,201 mM, respectively. Similarly, we also measured the values of Km for the substares of immobilized GST enzyme. Km values of glutathione and CDNB were 0,3042 mM and 0,2523 mM, respectively. We compared the thermal stability of free and immobilized GST enzyme at different temperatures. The availability of immobilized GST enzyme was investigated again. After 20 times used, it was reusability that immobilized GST enzyme saved the 50 % activity of itself. It was found that 32 % and 18 % of free GST enzyme activity were saved after 30 days of storage period at 4 °C and 25 °C respectively. For the immobilized enzyme, saved enzyme levels were 41 % and 20 % after 30 days of storage period at 4 °C and 25 °C, respectively.
Benzer Tezler
- Glutatyon S-transferaz enziminin tavuk karaciğerinden saflaştırılması karakterizasyonu ve bazı pestisitlerin enzim aktivitesi üzerine etkisi
Characterization of glutathion S-transferase enzyme from chicken liver and the effect of some pesticides on enzyme activity
HAKAN YILMAZ
- Glutatyon S-transferaz enziminin Van Gölü balığı (Chalcalburnus tarichi pallas) karaciğerinden saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi
Purification and characterization of glutathione S-transferase from the liver of Van Lake fish and investigation of some metal ions' effects on enzyme activity
MUHAMMET SERHAT ÖZASLAN
- Purification and characterization glutathione S-transferase enzyme from japanese quail (Coturnix coturnix Japonica) heart
Glutatyon S-transferaz enziminin bıldırcın (Coturnix coturnix Japonica) yürek dokusundan saflaştırılması ve karakterizasyonu
BARZAN MIRZA AHMED AHMED
- Glutatyon S-transferaz enziminin gökkuşağı alabalık (Oncorhynchus mykiss) eritrositlerinden saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı kimyasalların etkilerinin araştırılması
Purification and characterization of Glutathione S-transferase from rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) eriythrocyte and effects of some chemicals on enzyme activity
VEYSEL ÇOMAKLI
- Glutatyon s-transferaz enziminin koyun dalak dokusundan saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of glutathione s-transferase enzyme from sheep spleen tissue
FATİH YÜKSEL
