Mısır Püskülünden(Stylus maydis) polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması ve karaterizasyonu
purification and characterization of polyphenol oxidase from corn tassel(Stylus maydis)
- Tez No: 477584
- Danışmanlar: DOÇ. DR. REYHAN GÜL GÜVEN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Stylus maydis, Polifenol oksidaz, substrat spesifikli÷i, inhibisyon, Substrat, Stylus maydis, polyphenol oxidase, substrate specifity, inhibition, Substrate
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Dicle Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalÕúmada, mÕVÕr püskülü (Stylus maydis) polifenol oksidaz (PFO) enziminin saflaúWÕUÕlmasÕ yapÕlmÕú ve bazÕ kinetik özellikleri incelenmiútir. MÕVÕr püskülünden ekstrakte edilen polifenol oksidaz, (NHࢩ(ࢧSOࢩ) amonyum sülfat) çöktürmesi, diyaliz, ultrafiltrasyon ve jel kromatografisi prosodürleri kullanÕlarak saflaúWÕUÕldÕ. SaflaúWÕUÕlan enzim tek bir bant olarak SDS-PAGE'de elde edilmiútir. MÕVÕr püskülünün PFO enziminin molekül a÷ÕrlÕ÷Õ ise yaklaúÕk 158 kDa civarÕnda gözlemlenmiútir. Katekol ve 4-metil katekol substratlarÕ kullanÕlarak, PFO enziminin optimum pH ve VÕcaklÕk de÷erleri belirlenmiútir. Polifenol oksidaz aktivitesi 4-metilkatekol ve katekol için 420 nm'de spektofotomtrik olarak ölçülmüútür. Optimum sÕcaklÕk katekol için 40°C ve 4- metilkatekol için 30°C bulunmuútur. Optimum pH katekol için 8 ve 4-metilkatekol için 6 olarak tespit edilmiútir. AyrÕca PFO'nÕn substrat spesifikli÷i ve ÕVÕ inaktivasyonu incelenmiútir. PFO enziminin optimum pH ve sÕcaklÕkta katekol ve 4-metil katekol substratlarÕ için Km ve Vmax de÷erleri Linewear-Burk yöntemi ile bulunmuútur. Vmax/ Km de÷erlerine göre PFO enzimi için en uygun substratÕn katekol oldu÷u bulunmuútur. AyrÕca katekol kullanÕldÕ÷Õnda artan inaktivasyon süresine paralel olarak PFO aktivitesinin bariz bir úekilde azaldÕ÷Õ gözlemlenmiútir. EDTA, SDS ve sodyum azidin PFO aktivitesi üzerine inhibisyon etkisi katekol substratÕ kullanÕlarak etkisi incelendi. Bu çalÕúmada sÕrasÕyla sodyum azidin % 26.6 EDTA'nÕn % 22.2 ve SDS'nin % 12.2 oranÕnda enzimi inhibe etti÷i tespit edildi. AyrÕca sukroz, fruktoz, riboz ve glikoz gibi karbonhidratlarÕn PFO aktivitesi üzerine etkisi araúWÕUÕlmÕúWÕr. Fruktoz ve ribozun enzimi % 17 oranÕnda aktive etti÷i, glikozun % 16, sukrozun ise % 4 oranÕnda aktive etti÷i tespit edilmiútir.
Özet (Çeviri)
In this work, purification of polifenol oxidase enzyme from stylus maydis was done and some kinetic characteristics were analysed. Polifenol oxidase extracted from stylus maydis was purified by the procedures of ammonium sulphate (NHࢩ(ࢧSOࢩprecipitation, dialysis, ultrafiltration and jel chromatography. One band for purified enzyme was obtained by SDSPAGE. Molecular weight of stylus maydis PPO enzyme was calculated as approximately 158 kDa. Optimum pH and temperature values of PPO enzyme were determined by using catechol and methyl catechol substrates. Polifenol oxidase activity was measured for 4-methyl catechol ve catechol at 420 nm as spectrophotometric. Optimum temperature was founded as 40°Cfor catechol and 30°C for 4-methyl catechol. Optimum pH was determined as 8 for catechol and 6 for 4-methyl catechol. Besides, substrat specifity and temperature inactivation of PPO were analysed. PPO enzyme's Km and Vmax values for catechol and 4-methyl catechol substrates at optimum pH and temperature were determined by using Linewear-Burk method. According to Vmax and Km values, the most suitable substrate was found to be catechol. Furthermore, it was observed that PPO activity decreased clearly in paralel with increasing inactivation time when catechol used. Inhibition effect of EDTA, SDS and sodium azide on PPO activity was analysed by using catechol substrate. In this work, sodium azide, EDTA and SDS were found to inhibit the enzyme activity as 26.6 %, 22.2 % and 12.2 %, respectively. Besides, the effects of carbohydrates such as sucrose, fructose, ribose and glucose on PPO activity were investigated. The enzyme was found to be activated 17 % by fructose and ribose, 16 % by glucose and 4 % by sucrose.
Benzer Tezler
- İlkokul çağı erkek çocuklarında inmemiş testis anomalisi ve insidansı
The anomaly and incidence of cryptorchidism in primary school boys
SERDAR SEZGİN
- Süt formüllerinin tüketim uygulamaları ve süt formüllerinin C vitamini içeriği ile pH değerleri
Başlık çevirisi yok
GÖNÜL VAROL
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
Besin Hijyeni ve Teknolojisiİstanbul ÜniversitesiÇocuk Gelişimi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. TÜRKAN KUTLUAY
- Adolesan intihar girişimlerinin psiko-sosyal nedenleriyle ilgili araştırma
Başlık çevirisi yok
NAZMİYE YÜKSEL
- İsmayıl Hakkı Baltacıoğlu'nun kültür ve eğitim kavramı üzerine bir inceleme
An Examination of the concepts of culture and education of Ismayıl Hakkı Baltacıoğlu
ABDULLAH DİKİCİ
Doktora
Türkçe
1986
Eğitim ve ÖğretimUludağ ÜniversitesiEğitim Bilimleri Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SUAT ANAR