Geri Dön

Mycobacterium tuberculosis LppX proteinin rekombinant tüberküloz aşısı geliştirmede kullanımı

Utilization of LppX protein from Mycobacterium tuberculosis for development of recombinant tuberculosis vaccine

  1. Tez No: 550040
  2. Yazar: CENNET DOĞAN
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. SEZER OKAY
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2019
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Çankırı Karatekin Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 78

Özet

Tüberküloz (TB), Mycobacterium tuberculosis (MTB) bakterisinin neden olduğu bulaşıcı bir hastalıktır. Bu hastalık için kullanılan tek aşı BCG'nin erişkinlerde koruyuculuğu yetersiz kalmaktadır. Bu çalışmanın amacı, rekombinant tüberküloz aşısı geliştirmek için MTB izolatından lppX genini moleküler tekniklerle klonlayıp, LppX proteinini rekombinant olarak saflaştırarak, bu proteinin Montanide ISA 720 adjuvanıyla formülasyonunun hümoral ve hücresel bağışıklığı tetikleme kapasitelerini araştırmaktır. Bu çalışma için ilk olarak ülkemizdeki bir verem hastasından izole edilmiş olan M. tuberculosis suşundan lppX geni pGEM-T, sonrasında pET28a vektörüne klonlanlanarak E. coli BL21 suşuna aktarılmıştır. E. coli'de ifade edilen his-tag'lı rekombinant LppX proteini nikel kolonkullanılarak saflaştırılmış ve Montanide ISA 720 VG adjuvanı ile 7:3 oranında aşı formülasyonu hazırlanmıştır. Aşı formülasyonu, adjuvan ve BCG aşısı, Balb/c farelere enjekte edilmiş ve farelerden belirli aralıklarda serum toplanmıştır. Western blot tekniği rekombinant proteini kalitatif olarak görüntülemek için yapılmıştır. Rekombinant proteine ve BCG aşısına özgün serum kullanıldığında beklenen büyüklükte bantlar gözlenirken, sadece adjuvana özgün serum kullanıldığında bant gözlenmemiştir. Hümoral ve hücresel bağışıklığı tetikleme kapasiteleri değerlendirilmiştir. Bağışıklama öncesinde ve sonrasında IgG değerleri karşılaştırıldığında, hazırlanan aşı formülasyonunun hümoral bağışıklık yanıtını anlamlı düzeyde artırdığı belirlenmiştir. Hücresel bağışıklığı tetikleme kapasitesi serum interferon-gama (IFN-γ) ve interlökin-12 (IL-12) düzeyleri ile ölçülmüştür. LppX formülasyonunun IFN-γ düzeyini artırmada BCG aşısı kadar etkin olduğu, ancak IL-12 tetiklemede yetersiz kaldığı gözlemlenmiştir. Daha sonra yapılacak çalışmalarda, farklı immünojenik proteinlerle oluşturulacak ikili veya üçlü füzyonların daha etkili olabileceği düşünülmektedir.

Özet (Çeviri)

Tuberculosis (TB) is a contagious disease caused by the bacterium Mycobacterium tuberculosis (MTB). Today, BCG is the only vaccine used against TB. However, the protection of this vaccine in adults is insufficient. The purpose of this study was to clone the lppX gene from MTB isolate and to purify recombinant LppX protein for development of recombinant TB vaccine. The lppX gene from MTB strain, isolated from a TB patient in our country, was cloned into first pGEM-T and then pET28a vectors and transferred to E. coli BL21 strain. His-tag recombinant LppX protein expressed in E. coli was purified using nickel columns, and a 7: 3 vaccine formulation was prepared with Montanide ISA 720 VG adjuvant. Vaccine formulation, adjuvant and BCG vaccine, weres. c injected to 5 Balb/c miceand serum samples were collected at regular intervals from mice. The Western blot assay was performed to qualitatively screen the recombinant protein. While bands of the expected size were observed using the recombinant protein and the BCG vaccine-specific serum, the band was not observed only when the adjuvant-specific serum was used. When the IgG values were compared before and after immunization, the vaccine formulationwas significantly increased the humoral immune response. The capacity of these formulations to induce cellular immunity in Balb/c mice was measured by serum interferon-gamma (IFN-γ) and interleukin-12 (IL-12) levels. It was observed that the LppX formulation was as effective as the BCG vaccine in increasing the level of IFN-γ but it was not sufficient to boost IL-12 levels. In future studies, it is thought that double or triple fusions to be formed with different immunogenic proteins may be more effective.

Benzer Tezler

  1. Mycobacterium tuberculosis complex kökenlerinin MB/BacT sistemi ile ilaç duyarlılıklarının saptanması ve sistemin standardize edilmesi

    Başlık çevirisi yok

    MEHMET ALİ DİBEK

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    MikrobiyolojiEge Üniversitesi

    Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ALTINAY BİLGİÇ

  2. Mycobacterium tuberculosis tanısında polimeraz zincir reaksiyonu tekniğinin kullanımı

    The Utility of polymerase chain reaction in the diagnosis of mycobacterium tuberculosis

    SEZGİN GÜNEŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon HastalıklarıOndokuz Mayıs Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HASAN BAĞCI

  3. Çok ilaca dirençli mycobakterium tuberculosis suşlarının moleküler karakterizasyonu

    Molecular characterization of multidrug resistant mycobacterium tuberculosis strains

    ÜMİT ALANBAYI

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    MikrobiyolojiKırıkkale Üniversitesi

    Temel Tıp Bilimleri Bölümü

    PROF. RIZA DURMAZ

  4. Mycobacterium tuberculosis klinik izolatlarında ilaç direncinin multipleks 'Real-Time PCR' yöntemiyle saptanması

    Detection of drug resistance in mycobacterium tuberculosis clinical isolates by multiplex Real-Time PCR

    FATMA NUR AKDOĞAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    MikrobiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ZEYNEP SARIBAŞ

  5. Mycobacterium tuberculosis man-lam antijeninin fibroblast-makrofaj kokültür modelinde makrofaj polarizasyonuna etkisinin araştırılması

    Investigation the effect of mycobacterium tuberculosis man-lam antigen on fibroblast–macrophage coculture model to the macrophage

    NURHAN ALBAYRAK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon HastalıklarıGazi Üniversitesi

    İmmünoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMİN ÜMİT BAĞRIAÇIK