Mycobacterium tuberculosis LppX proteinin rekombinant tüberküloz aşısı geliştirmede kullanımı
Utilization of LppX protein from Mycobacterium tuberculosis for development of recombinant tuberculosis vaccine
- Tez No: 550040
- Danışmanlar: DOÇ. DR. SEZER OKAY
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Çankırı Karatekin Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 78
Özet
Tüberküloz (TB), Mycobacterium tuberculosis (MTB) bakterisinin neden olduğu bulaşıcı bir hastalıktır. Bu hastalık için kullanılan tek aşı BCG'nin erişkinlerde koruyuculuğu yetersiz kalmaktadır. Bu çalışmanın amacı, rekombinant tüberküloz aşısı geliştirmek için MTB izolatından lppX genini moleküler tekniklerle klonlayıp, LppX proteinini rekombinant olarak saflaştırarak, bu proteinin Montanide ISA 720 adjuvanıyla formülasyonunun hümoral ve hücresel bağışıklığı tetikleme kapasitelerini araştırmaktır. Bu çalışma için ilk olarak ülkemizdeki bir verem hastasından izole edilmiş olan M. tuberculosis suşundan lppX geni pGEM-T, sonrasında pET28a vektörüne klonlanlanarak E. coli BL21 suşuna aktarılmıştır. E. coli'de ifade edilen his-tag'lı rekombinant LppX proteini nikel kolonkullanılarak saflaştırılmış ve Montanide ISA 720 VG adjuvanı ile 7:3 oranında aşı formülasyonu hazırlanmıştır. Aşı formülasyonu, adjuvan ve BCG aşısı, Balb/c farelere enjekte edilmiş ve farelerden belirli aralıklarda serum toplanmıştır. Western blot tekniği rekombinant proteini kalitatif olarak görüntülemek için yapılmıştır. Rekombinant proteine ve BCG aşısına özgün serum kullanıldığında beklenen büyüklükte bantlar gözlenirken, sadece adjuvana özgün serum kullanıldığında bant gözlenmemiştir. Hümoral ve hücresel bağışıklığı tetikleme kapasiteleri değerlendirilmiştir. Bağışıklama öncesinde ve sonrasında IgG değerleri karşılaştırıldığında, hazırlanan aşı formülasyonunun hümoral bağışıklık yanıtını anlamlı düzeyde artırdığı belirlenmiştir. Hücresel bağışıklığı tetikleme kapasitesi serum interferon-gama (IFN-γ) ve interlökin-12 (IL-12) düzeyleri ile ölçülmüştür. LppX formülasyonunun IFN-γ düzeyini artırmada BCG aşısı kadar etkin olduğu, ancak IL-12 tetiklemede yetersiz kaldığı gözlemlenmiştir. Daha sonra yapılacak çalışmalarda, farklı immünojenik proteinlerle oluşturulacak ikili veya üçlü füzyonların daha etkili olabileceği düşünülmektedir.
Özet (Çeviri)
Tuberculosis (TB) is a contagious disease caused by the bacterium Mycobacterium tuberculosis (MTB). Today, BCG is the only vaccine used against TB. However, the protection of this vaccine in adults is insufficient. The purpose of this study was to clone the lppX gene from MTB isolate and to purify recombinant LppX protein for development of recombinant TB vaccine. The lppX gene from MTB strain, isolated from a TB patient in our country, was cloned into first pGEM-T and then pET28a vectors and transferred to E. coli BL21 strain. His-tag recombinant LppX protein expressed in E. coli was purified using nickel columns, and a 7: 3 vaccine formulation was prepared with Montanide ISA 720 VG adjuvant. Vaccine formulation, adjuvant and BCG vaccine, weres. c injected to 5 Balb/c miceand serum samples were collected at regular intervals from mice. The Western blot assay was performed to qualitatively screen the recombinant protein. While bands of the expected size were observed using the recombinant protein and the BCG vaccine-specific serum, the band was not observed only when the adjuvant-specific serum was used. When the IgG values were compared before and after immunization, the vaccine formulationwas significantly increased the humoral immune response. The capacity of these formulations to induce cellular immunity in Balb/c mice was measured by serum interferon-gamma (IFN-γ) and interleukin-12 (IL-12) levels. It was observed that the LppX formulation was as effective as the BCG vaccine in increasing the level of IFN-γ but it was not sufficient to boost IL-12 levels. In future studies, it is thought that double or triple fusions to be formed with different immunogenic proteins may be more effective.
Benzer Tezler
- Mycobacterium tuberculosis complex kökenlerinin MB/BacT sistemi ile ilaç duyarlılıklarının saptanması ve sistemin standardize edilmesi
Başlık çevirisi yok
MEHMET ALİ DİBEK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1999
MikrobiyolojiEge ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALTINAY BİLGİÇ
- Mycobacterium tuberculosis tanısında polimeraz zincir reaksiyonu tekniğinin kullanımı
The Utility of polymerase chain reaction in the diagnosis of mycobacterium tuberculosis
SEZGİN GÜNEŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
1999
Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon HastalıklarıOndokuz Mayıs ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HASAN BAĞCI
- Çok ilaca dirençli mycobakterium tuberculosis suşlarının moleküler karakterizasyonu
Molecular characterization of multidrug resistant mycobacterium tuberculosis strains
ÜMİT ALANBAYI
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2013
MikrobiyolojiKırıkkale ÜniversitesiTemel Tıp Bilimleri Bölümü
PROF. RIZA DURMAZ
- Mycobacterium tuberculosis klinik izolatlarında ilaç direncinin multipleks 'Real-Time PCR' yöntemiyle saptanması
Detection of drug resistance in mycobacterium tuberculosis clinical isolates by multiplex Real-Time PCR
FATMA NUR AKDOĞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
MikrobiyolojiHacettepe ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ZEYNEP SARIBAŞ
- Mycobacterium tuberculosis man-lam antijeninin fibroblast-makrofaj kokültür modelinde makrofaj polarizasyonuna etkisinin araştırılması
Investigation the effect of mycobacterium tuberculosis man-lam antigen on fibroblast–macrophage coculture model to the macrophage
NURHAN ALBAYRAK
Doktora
Türkçe
2014
Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon HastalıklarıGazi Üniversitesiİmmünoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EMİN ÜMİT BAĞRIAÇIK