Ham ve kısmen saflaştırılmış kayısı polifenol oksidaz (PPO) ve peroksidaz (POD) enzimlerinin bazı özellikleri
Some characteristics of crude and partially purified poliphenol oxidase (PPO) and peroxidase (POD) from apricots
- Tez No: 76619
- Danışmanlar: PROF. DR. BEKİR CEMEROĞLU
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Gıda Mühendisliği, Food Engineering
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1998
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 101
Özet
ÖZET Doktora Tezi HAM VE KISMEN SAFLAŞTIRILMIŞ KAYISI POLIFENOL OKSİDAZ (PPO) VE PEROKSİDAZ (POD) ENZİMLERİNİN BAZI ÖZELLİKLERİ Ahmet YEMENICIOGLU Ankara Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Gıda Mühendisliği Anabilim Dalı Danışman : Prof.Dr.Bekir CEMEROGLU Bu çalışmada, ham ve kısmen saflaştırılmış kayısı polifenol oksidaz (PPO) ve peroksidaz (POD) enzimlerinin çeşitli nitelikleri belirlenmiştir. Materyal olarak Türkiye'de en çok üretilen ve işlenen kayısı çeşitleri olan Hacıhaliloğlu ve Çataloğlu ile son yıllarda ıslah edilmiş bir çeşit olan Kabaaşı kullanılmıştır. Ham ekstraktlarla yürütülmüş olan ısıl inaktivasyon çalışmaları sonuçlarına göre; Hacıhaliloğlu kayısılarında olgunluğun her aşamasında ısıya dirençli (Dso = 9.6-15.7 dak) izoenzimler bulunmaktadır. Buna karşın Kabaaşı kayısılarında olgunluğun hiçbir aşamasında ısıya dirençli (D8o= 2.3- 5.3 dak ) izoenzimler bulunmamaktadır. Çataloğlu kayısıları ise yalnızca yarı olgun dönemde dirençli fraksiyonlar (D80=13.3 dak) içermektedirler. Yürütülmüş olan çalışmalar ayrıca 90°C'nin tüm kayısı çeşitlerinde PPO enziminin ısıl inaktivasyonu açısından kritik bir sıcaklık derecesi olduğunu göstermiştir. Buna göre 90°C'de ve daha yüksek sıcaklıklarda PPO enziminin aktivitesini büyük bir süratle yitirdiği belirlenmiştir.İncelenen tüm kayısı çeşitlerinde PPO enziminin kateşolaz aktivitesi için ısıl stabilite, krezolaz aktivitesininkine göre daha yüksektir. Ayrıca, bazı sıcaklık derecelerinde krezolaz aktivitesinin ısı etkisiyle belirgin olarak aktivite olduğu da saptanmıştır. Buna karşın kateşolaz aktivitesi için belirgin bir aktivasyon gözlenememiştir. Ham ekstraktta bulunan PPO enzimlerinin optimum sıcaklıkları; Hacıhaliloğlu'nda 45°C, Çataloğlu'nda 40°C ve Kabaaşı çeşitinde ise 35°C olarak belirlenmiştir. Çalışmada ayrıca; Hacıhaliloğlu kayısı çeşidinde bulunan POD enzimlerinin ısıl inaktivasyonu da incelenmiştir. Buna göre Hacıhaliloğlu POD enziminin büyük bir kısmının ısıya duyarlı olduğu belirlenmiştir. Diğer yandan oranı az olan ısıya dirençli fraksiyon için belirlenmiş olan D86=14.2 dak değeri, bu fraksiyonun ısıl direncinin aynı çeşitteki PPO enzimininkinden oldukça fazla olduğunu göstermektedir. Kayısılarda bulunan PPO ve POD enzimlerinin kısmen saflaştırılmasında asetonla çöktürme, dializ ve DEAE-selüloz kolon kromatografisi tekniklerinden yararlanılmıştır. Elde edilmiş olan DEAE- selüloz kromatogramlarına göre; Hacıhaliloğlu PPO enzimi iki ana fraksiyon (F1, F2) ve dört alt fraksiyondan (F3 F6) oluşmaktadır. Diğer yandan Hacıhaliloğlu POD enziminin ise başlıca dört fraksiyondan oluştuğu belirlenmiştir. DEAE-selüloz kolon kromatografisinin uygulanmasında kolonun doldurulması ve elüsyonunda iki farklı işlem izlenmiştir. Bu işlemlerden îlkinde, ayrılmış olan PPO fraksiyonlarından iki ana fraksiyon (F1 ve F2) karakterize edilmiştir. Buna göre F1 ve F2' nin başlıca ısıl karakteristikleri şöyledir: z ve Ea değerleri F1 için sırasıyla 10.4°C ve 50.7 kcal.mol“1, F2 için ise sırasıyla 10.1°C ve 51.9 kcal.mol'1,dir. Optimum sıcaklıkları, F1 için 35 °C, F2 içinse 30°C dir. Gerek F1 ve gerekse F2' nin optimum pH'sı 6.8-7.5 arasındadır. Km ve Vmax değerleri sırasıyla F1 için 14 mM ve 5.4 Aabs.mL'1 dak”1, F2 ise 17 mM ve 4.2 Aabs.mL“1.dak”1 dır. Her iki fraksiyonun substrat kullanım önceliği sırasıyla 4-metilkateşol, (+) kateşin ve kateşol şeklindedir. Uygulanan ikinci işlemde, PPO ve POD enzimleri bir kromatogramda aynı anda ayrılmış ve ayrıca bir önceki İşleme göre oldukça yüksek bir saflığa ulaşılmıştır. Ayrılmış olan PPO ve POD fraksiyonlarının sıcaklık derecesi profilleri, Hacıhaliloğlu kayısılarında her iki enzimin de ısıl direnci birbirinden farklı izoenzimlerden oluştuğunu ortaya koymuştur. 1998, 84 Sayfa ANAHTAR KELİMELER : Kayısı, Polifenol oksidaz, Peroksidaz, Isıl stabilite, Kısmi saflaştırma.
Özet (Çeviri)
Ill ABSTRACT Ph.D.Thesis SOME CHARACTERISTICS OF CRUDE AND PARTIALLY PURIFIED POLIPHENOL OXIDASE (PPO) AND PEROXIDASE (POD) FROM APRICOTS Ahmet YEMENICIOGLU Ankara University Graduate Scholl of Natural and Applied Sciences Department of Food Engineering Supervisor : Prof.Dr.Bekir CEMERO?LU In this study some characteristics of crude and partially purified polyphenol oxidase (PPO) and peroxidase (POD) from apricots were determined. The cultivars used in this study Hacıhaliloğlu, Çataloğlu and Kabaaşı are the most extensively produced and processed cultivars in Turkey. The inactivation studies, carried out with crude enzyme extracts, revealed that in every stage of maturity most of the PPO activity from Hacıhaliloğlu apricots consisted of heat stable (D8oB 9.6-15.7 min) isoenzymes. In contrast, Kabaaşı apricots did not contain heat stable (D8o= 2.3-5.3 min) isoenzymes whereas, Çataloğlu apricots contained heat stable (Dso13.3 min) isoenzymes only at half-ripe stage. For the inactivation ofIV apricot PPO, 90°C is a critical temperature. At this temperature instantaneous inactivation of PPO occurred. In all apricot cultivars studied, the heat stability of catecholase activity of PPO was higher than that of the cresolase activity. At some inactivation temperatures cresolase activity showed considerable activation whereas, catecholase activity showed very little activation. The temperature optima for the crude PPO were 45°C for Hacıhaliloğlu apricot, 40°C for Çataloğlu apricot and 35°C for Kabaaşı apricot. The heat inactivation of crude POD from Hacıhaliloğlu apricots was also studied. The POD from Hacıhaliloğlu apricots mostly consisted of heat labile isoenzymes. However, the heat stable fraction of POD with its D85 of 14.2 min was more heat stable than PPO from the same variety. Acetone precipitation, dialysis and DEAE-cellulose column chromatographic procedures were carried out for the partial purification of PPO from Hacıhaliloğlu apricots. The profiles of DEAE-cellulose chromatograms revealed that PPO from Hacıhaliloğlu apricots consisted of two PPO fractions (F1 and F2) and four PPO sub-fraction (F3 to F6), whereas POD from Hacıhaliloğlu apricots consisted of four enzyme fractions. Two different procedures were followed for the packing and elution of DEAE-cellulose column. In one of these procedures two main fractions of PPO (F1 and F2) were separated and characterized. Characteristics of F1 and F2 fractions were as follows: z and Ea values were 10.4°C and 50.7 kcal.mol“1 for F1 and 10.1°C and 51.9 kcal mol”1 for F2 fraction, respectively. The temperature optima were 35°C for F1 and 30°C for F2 fraction. Both F1 and F2 had a pH optimum between 6.8-7.5. The respective Km and Vmax values for F1 and F2 were 14 mM, 5.4 Aabs.mL“1 mm'1 and 17 mM, 4.2 Aabs.mL”1.min"1. The two main fraction acted mainly on 4-methylcatechol, (+) catechin and catechol.respectively. In the other procedure PPO and POD were separated in the same cromatogram with higher specific activities. The temperature profiles of separated POD and PPO fractions indicated the presence of different isoenzymes with varying heat stabilities. 1998, 84 Pages Key Words : Apricot, Poliphenol oxidase, Peroxidase, Heat stability, Partial purification.
Benzer Tezler
- Kuru incirlerde küf florası ve aflatoksigenik küflerin saptanması
Başlık çevirisi yok
SİBEL BÜYÜKŞİRİN
- Production of pectinase enzyme from Aspergillus sojae in batch and fed-batch systems
Kesikli ve yarı-kesikli sistemlerde Aspergillus sojae'den pektinaz enzimi üretimi
NERGİZ DOĞAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2008
Biyoteknolojiİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. CANAN TARI
PROF. DR. ŞEBNEM HARSA
- Partial purification and characerization of neutral trehalase from baker's yeast
Nötral trehalaz enziminin ekmek mayası Saccharomyces cerevisiae' den kısmen saflaştırılması ve karakterizasyonu
SANİYE YARAR
Yüksek Lisans
İngilizce
1997
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HALUK HAMAMCI
- Isolation and preliminary characterization of hexokinase from rhizopus oryzae
Başlık çevirisi yok
ŞEYDA AÇAR
Yüksek Lisans
İngilizce
1999
BiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MERAL YÜCEL
- Partial purification and kinetic characterization of l-lactate dehydrogenase from rhizopus oryzae
Rhizopus oryzae'den laktat dehidrogenazın kısmi saflaştırılması ve kinetik karakterizasyonu
AYLA ARSLAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2001
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HALUK HAMAMCI
PROF. DR. MERAL YÜCEL
