Deneysel iskemi modelinde neurod2 tedavisinin moleküler etkilerinin incelenmesi
Investagation of the molecular effects of neurod2 treatment in experimental ischemia model
- Tez No: 782965
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ MERVE BEKER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Tıbbi Biyoloji, Biotechnology, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Sağlık Bilimleri Üniversitesi
- Enstitü: Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 81
Özet
Amaç: Günümüzde beyin felcinde klinik uygulanabilirliği olan tek tedavi edici ajan, doku plazminojen aktivatörüdür (tPA). Günümüzde transkripsiyon faktörleri olası tedaviler arasında yer almaktadır. NeuroD2 beyinde salgılanan nörogenezi ve farklılaşmayı indükleyen nöronal bir transkripsiyon faktörüdür. Yapılan bu çalışmada in vitro deneysel iskemi yönteminde, nöroplastisiteyi ve sağ kalımı tetikleyen bir transkripsiyon faktörü olan NeuroD2 ifadesinin arttırılma ve inhibe edilmesiyle beraber gerçekleşen moleküler değişikliklerin araştırılması amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Lentiviral vektörler içerisine gen klonlama yöntemleri aracılığı ile NeuroD2 geninin over-ekspresyon ve inhibisyon grupları oluşturulmuştur. Oksijen Glikoz Deprivasyonu (OGD) yöntemi ile in vitro ortamda fare nöroblastoma hücreleri olan N2a hücreleri üzerinde iskemi koşullarının oluşturulmuştur. Apoptoz analizleri Terminal deoksinükleotidil transferaz dUTP uç etiketleme (TUNEL) yöntemi ile yapılmıştır. NeuroD2 over-ekspresyonun ve inhibisyonun protein ifadesine etkisini tespit edebilmek için Western Blot yöntemi kullanılmıştır. Bulgular: İskemik koşullar altında NeuroD2 over-ekspresyonun grubunun hücrelerdeki sağ kalımını arttırdığı ve hücrelerin apoptoza girmesini anlamlı olarak azalttığı, NeuroD2 inhibisyon grubunun ise sağ kalımı anlamlı olarak azalttığı görülmüştür. NeuroD2 over-ekspresyon grubunun p-PTEN ve p-GSK3 α/β ifadesini azaltarak, mTOR ifadesini ise arttırarak AKT sağ kalım yolağını düzenlediği düşünülmektedir. NeuroD2 over-ekspresyon grubununda azalan p-Nfκ-β ve nNOS proteinlerinin ifadelerinin azaldığı gözlemlenmiştir. NeuroD2 inhibisyon grubunda p-PTEN, p-GSK3α/β, mTOR, p-Nfƙ-B ve nNOS proteinlerinin ifadesinde ve TUNEL boyamasında anlamlı bir değişim gözlemlenmemişken p-AKT ifadesi anlamlı olarak artış göstermiştir. NeuroD2 over-ekspresyon ve inhibisyon grubunda Sinaptofizin ve HIF1α ifadelerinde anlamlı bir değişim gözlenmemiştir. Sonuç: NeuroD2 over-ekspresyonu anlamlı bir şekilde hücrelerin hipoksik ortamda sağ kalımını arttırmakta, apoptosisi, inflamasyonu ve oksidatif stresi azaltmaktadır ve AKT yolağını düzenlediği görülmektedir. Bu bağlamda NeuroD2 iskemi tedavisi için potansiyel bir aday olabilmektedir.
Özet (Çeviri)
Aim: Currently, the only therapeutic agent with clinical applicability in stroke is tissue plasminogen activator (tPA). Today, transcription factors are among the possible treatments. NeuroD2 is a neuronal transcription factor secreted in the brain that induces neurogenesis and differentiation. In this study, it was aimed to investigate the molecular changes that occur with increasing and inhibiting the expression of NeuroD2, a transcription factor that triggers neuroplasticity and survival, in the in vitro experimental ischemia method. Materials and Methods: Over-expression and inhibition groups of NeuroD2 gene were formed by gene cloning methods into lentiviral vectors. With the Oxygen Glucose Deprivation (OGD) method, ischemia conditions were established on N2a cells, which are mouse neuroblastoma cells, in vitro. Apoptosis analysis were performed by Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP end-tagging (TUNEL) method. Western blot method was used to determine the effect of NeuroD2 over-expression and inhibition on protein expression. Results: It was observed that under ischemic conditions, the NeuroD2 overexpression group increased cell survival and significantly reduced cell apoptosis, while the NeuroD2 inhibition group significantly decreased survival. NeuroD2 over-expression group is thought to regulate the AKT survival pathway by decreasing p-PTEN and p-GSK3 α/β expression and increasing mTOR expression. It was observed that the expression of p-Nfκβ and nNOS proteins decreased in the NeuroD2 over-expression group. In the NeuroD2 inhibition group, no significant change was observed in the expression of p-PTEN, pGSK3α/β, mTOR, p-Nfƙ-B and nNOS proteins and TUNEL staining, whereas p-AKT expression increased significantly. No significant change was observed in Synaptophysin and HIF1α expressions in NeuroD2 over-expression and inhibition group. Conclusion: NeuroD2 over-expression significantly increases cell survival in a hypoxic environment, reduces apoptosis, inflammation and oxidative stress, and appears to regulate the AKT pathway. In this context, NeuroD2 may be a potential candidate for the treatment of ischemia.
Benzer Tezler
- Deneysel serebral iskemi modelinde kan-beyin bariyeri biyobelirteçlerinin değerlendirilmesi
Evalution of blood-brain barrier biomarkers in experimental cerebral i̇schemia model
GÜL TAŞLI YEŞİLÇAYIR
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2021
NörolojiAydın Adnan Menderes ÜniversitesiAcil Tıp Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ YUNUS EMRE ÖZLÜER
- Deneysel iskemi ve reperfüzyon modelinde böbrek dokusunun histolojik olarak incelenmesi
Histological evaluation of the kidney in an experimental ischemia-reperfusion injury model
BEKİR UĞUR ERGÜR
Doktora
Türkçe
2002
MorfolojiDokuz Eylül ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. ZİŞAN BULDAN
- Deneysel renal iskemi modelinde ketamin ve deksmedetomidinin iskemi-reperfüzyon hasarı üzerine etkileri
Effects of ketamine and dexmedetomide on ischemia-reperfusion injury in experimental renal ischemia model
MUHAMMET HANİFİ ERDOĞAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2021
Anestezi ve Reanimasyonİstanbul Medeniyet ÜniversitesiAnesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MELEK GÜRA ÇELİK
- Deneysel mezenter iskemi modelinde YKL-40 düzeyinin yeri
The place of YKL-40 level in experimental mesenteric ischemia model
MUHAMMED ALİ AKBULUT
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2022
Genel CerrahiNecmettin Erbakan ÜniversitesiGenel Cerrahi Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ MEHMET AYKUT YILDIRIM
- Deneysel mezenter iskemi modelinde VAP 1'in tanısal değerinin IFABP ile karşılaştırılması
Comparison of the diagnostic values of vascular adhesion protein-1 and intestinal fatty acid binding protein in the diagnosis of acute mesenteric ischemia
DAMLA AYDIN ALTAY
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2018
İlk ve Acil YardımKaradeniz Teknik ÜniversitesiAcil Tıp Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. AYNUR ŞAHİN