Deneysel iskemi modelinde neurod2 tedavisinin moleküler etkilerinin incelenmesi
Investagation of the molecular effects of neurod2 treatment in experimental ischemia model
- Tez No: 782965
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ MERVE BEKER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Biyoteknoloji, Medical Biology, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Gen tedavisi, Glükoz, Nöronal plastisite, Oksijen, İnme, İnme rehabilitasyonu, İskemi, Gene therapy, Glucose, Neuronal plasticity, Oxygen, Stroke, Stroke rehabilitation, Ischemia
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Sağlık Bilimleri Üniversitesi
- Enstitü: Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Amaç: Günümüzde beyin felcinde klinik uygulanabilirliği olan tek tedavi edici ajan, doku plazminojen aktivatörüdür (tPA). Günümüzde transkripsiyon faktörleri olası tedaviler arasında yer almaktadır. NeuroD2 beyinde salgılanan nörogenezi ve farklılaşmayı indükleyen nöronal bir transkripsiyon faktörüdür. Yapılan bu çalışmada in vitro deneysel iskemi yönteminde, nöroplastisiteyi ve sağ kalımı tetikleyen bir transkripsiyon faktörü olan NeuroD2 ifadesinin arttırılma ve inhibe edilmesiyle beraber gerçekleşen moleküler değişikliklerin araştırılması amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Lentiviral vektörler içerisine gen klonlama yöntemleri aracılığı ile NeuroD2 geninin over-ekspresyon ve inhibisyon grupları oluşturulmuştur. Oksijen Glikoz Deprivasyonu (OGD) yöntemi ile in vitro ortamda fare nöroblastoma hücreleri olan N2a hücreleri üzerinde iskemi koşullarının oluşturulmuştur. Apoptoz analizleri Terminal deoksinükleotidil transferaz dUTP uç etiketleme (TUNEL) yöntemi ile yapılmıştır. NeuroD2 over-ekspresyonun ve inhibisyonun protein ifadesine etkisini tespit edebilmek için Western Blot yöntemi kullanılmıştır. Bulgular: İskemik koşullar altında NeuroD2 over-ekspresyonun grubunun hücrelerdeki sağ kalımını arttırdığı ve hücrelerin apoptoza girmesini anlamlı olarak azalttığı, NeuroD2 inhibisyon grubunun ise sağ kalımı anlamlı olarak azalttığı görülmüştür. NeuroD2 over-ekspresyon grubunun p-PTEN ve p-GSK3 α/β ifadesini azaltarak, mTOR ifadesini ise arttırarak AKT sağ kalım yolağını düzenlediği düşünülmektedir. NeuroD2 over-ekspresyon grubununda azalan p-Nfκ-β ve nNOS proteinlerinin ifadelerinin azaldığı gözlemlenmiştir. NeuroD2 inhibisyon grubunda p-PTEN, p-GSK3α/β, mTOR, p-Nfƙ-B ve nNOS proteinlerinin ifadesinde ve TUNEL boyamasında anlamlı bir değişim gözlemlenmemişken p-AKT ifadesi anlamlı olarak artış göstermiştir. NeuroD2 over-ekspresyon ve inhibisyon grubunda Sinaptofizin ve HIF1α ifadelerinde anlamlı bir değişim gözlenmemiştir. Sonuç: NeuroD2 over-ekspresyonu anlamlı bir şekilde hücrelerin hipoksik ortamda sağ kalımını arttırmakta, apoptosisi, inflamasyonu ve oksidatif stresi azaltmaktadır ve AKT yolağını düzenlediği görülmektedir. Bu bağlamda NeuroD2 iskemi tedavisi için potansiyel bir aday olabilmektedir.
Özet (Çeviri)
Aim: Currently, the only therapeutic agent with clinical applicability in stroke is tissue plasminogen activator (tPA). Today, transcription factors are among the possible treatments. NeuroD2 is a neuronal transcription factor secreted in the brain that induces neurogenesis and differentiation. In this study, it was aimed to investigate the molecular changes that occur with increasing and inhibiting the expression of NeuroD2, a transcription factor that triggers neuroplasticity and survival, in the in vitro experimental ischemia method. Materials and Methods: Over-expression and inhibition groups of NeuroD2 gene were formed by gene cloning methods into lentiviral vectors. With the Oxygen Glucose Deprivation (OGD) method, ischemia conditions were established on N2a cells, which are mouse neuroblastoma cells, in vitro. Apoptosis analysis were performed by Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP end-tagging (TUNEL) method. Western blot method was used to determine the effect of NeuroD2 over-expression and inhibition on protein expression. Results: It was observed that under ischemic conditions, the NeuroD2 over expression group increased cell survival and significantly reduced cell apoptosis, while the NeuroD2 inhibition group significantly decreased survival. NeuroD2 over-expression group is thought to regulate the AKT survival pathway by decreasing p-PTEN and p-GSK3 α/β expression and increasing mTOR expression. It was observed that the expression of p-Nfκ β and nNOS proteins decreased in the NeuroD2 over-expression group. In the NeuroD2 inhibition group, no significant change was observed in the expression of p-PTEN, p GSK3α/β, mTOR, p-Nfƙ-B and nNOS proteins and TUNEL staining, whereas p-AKT expression increased significantly. No significant change was observed in Synaptophysin and HIF1α expressions in NeuroD2 over-expression and inhibition group. Conclusion: NeuroD2 over-expression significantly increases cell survival in a hypoxic environment, reduces apoptosis, inflammation and oxidative stress, and appears to regulate the AKT pathway. In this context, NeuroD2 may be a potential candidate for the treatment of ischemia.
Benzer Tezler
- Deneysel iskemi ve reperfüzyon modelinde böbrek dokusunun histolojik olarak incelenmesi
Histological evaluation of the kidney in an experimental ischemia-reperfusion injury model
BEKİR UĞUR ERGÜR
Doktora
Türkçe
2002
MorfolojiDokuz Eylül ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. ZİŞAN BULDAN
- Deneysel diyabet modelinde serebral iskemi reperfüzyon sonucu oluşan oksidatif hasarın ve antioksidan tedavi etkilerinin incelenmesi
The investigation of the oxidative injury and the effects of antioxidant therapy due to cerebral ischemia reperfusion in experimental diabetes model
PINAR ATUKEREN
- Deneysel hepatik iskemi-reperfüzyon modelinde Levosimendan infüzyonun karaciğere etkilerinin araştırılması
Effects of Levosimendan on experimental hepatic ischemia-reperfusion injury
AYGANIM AHMETOVA
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2010
Anestezi ve ReanimasyonDokuz Eylül ÜniversitesiAnesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. UĞUR KOCA
- Deneysel intestinal iskemi reperfüzyon modelinde reperfüzyon sonrası uygulanan levosimendanın etkileri
Effects of levosimendan administered after reperfusion in experimental intestinal ischemia reperfusion model
HAKAN AYGÜN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2011
Anestezi ve ReanimasyonDokuz Eylül ÜniversitesiAnesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÇİMEN OLGUNER
- Deneysel beyin iskemi reperfüzyon modelinde öğrenme ve hafıza değişikliklerine ghrelinin etkisi ve mekanizmaları
Effects and mechanısms of actıon of ghrelın on learnıng and memory changes ın experımental cerebral ıschemıa reperfusıon model.
GÖKSUN BAŞARANLAR ÖNCEL