Rekombinant MrkD proteininin fibroblast hücresine ve kolajene adezyondaki rolünün belirlenmesi
Determination of the role of recombinant MrkD protein in adhesion to fibroblast cells and collagen
- Tez No: 971300
- Danışmanlar: PROF. DR. BÜLENT BOZDOĞAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Mikrobiyoloji, Biyoteknoloji, Biyomühendislik, Microbiology, Biotechnology, Bioengineering
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Aydın Adnan Menderes Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Amaç: Bu tezde, rekombinant olarak üretilen MrkD proteininin insan fibroblast hücreleri ve kolajenle olan etkileşimi moleküler düzeyde incelenmiş, bu proteinin potansiyel terapötik hedef olarak değerlendirilmesi amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Rekombinant DNA teknolojisi ile K. pneumoniae'nin mrkD geninin çoğaltılması için primerler tasarlanmış ve çoğaltılan gen pET30a(+) ekpresyon vektörüne klonlanmıştır ardından E. coli BL21 hücrelerine transforme edilmiştir. MrkD proteini IMAC yöntemi ile saflaştırılmış, fibroblast hücre hattına karşı sitotoksitesi ve K. pneumoniae'nin hücreye bağlanabilme potansiyelindeki etkisi incelenmiştir. Ayrıca MrkD proteininin Tip V kolajen ile olan etkileşim değerleri ELISA yöntemi ile ölçülmüştür. Bulgular: Saflaştırılan MrkD proteininin boyu 40.8 kDa olarak hesaplanmıştır. MrkD proteinin tip V kolajen ile etkileşim gösterdiği ELISA yöntemi ile doğrulanmıştır. Proteinin BJ fibroblast hücrelerine dair herhangi bir sitotoksik etkisinin olmadığı Wst-1 yöntemi ile belirlenmiştir. MrkD proteini K. pneumoniae'nin Bj hücrelerine bağlanma potansiyelini yaklaşık 0,85 log azaltmıştır. Sonuç: Bu çalışma kapsamında, BJ insan fibroblast hücreleriyle MrkD proteini arasında gerçekleşen etkileşim ilk kez deneysel olarak ortaya konmuş ve protein yapısının sitotoksik potansiyeli doğrudan analiz edilmiştir. Elde edilen sonuçların, MrkD proteininin kolajenle ilişkisini açıklığa kavuşturması ve tedavi hedefi olabilecek yapılar için yol gösterici olması beklenmektedir.
Özet (Çeviri)
Objective: The present study aimed to investigate, at the molecular level, the interaction of recombinant MrkD protein with human fibroblast cells and type V collagen, and to evaluate its potential as a therapeutic target. Material and Methot: The mrkD gene from K. pneumoniae was amplified using specifically designed primers and cloned into the pET30a(+) expression vector, followed by transformation into E. coli BL21 cells. The recombinant MrkD protein was purified using IMAC. Its cytotoxicity on BJ human fibroblast cells was assessed via the WST-1 assay, and its impact on bacterial adhesion capacity was determined. In addition, ELISA assays were employed to evaluate the interaction between MrkD and type V collagen. Results: The molecular weight of the purified recombinant MrkD protein was determined to be approximately 40.8 kDa. ELISA analyses confirmed the specific interaction between MrkD and type V collagen. WST-1 assay results indicated that MrkD exhibited no cytotoxic effects on BJ fibroblast cells. Furthermore, the presence of recombinant MrkD protein was associated with a reduction of approximately 0.85 log in the adhesion of K. pneumoniae to fibroblast cells. Conclusion: This study provides the first experimental evidence demonstrating the specific interaction between recombinant MrkD protein and human fibroblast cells. It also directly evaluates the cytotoxic potential of MrkD. The findings offer new insights into the collagen-binding capacity of this adhesin and suggest that MrkD may serve as a promising target for anti-adhesion therapeutic strategies against K. pneumoniae infections.
Benzer Tezler
- Rekombinant HB aşısı uygulanan şahıslarda reaksiyonlar ve bağışıklık cevabı araştırılması
Investigation of immun response and lreactions in persons vaccinated with recombinant hepatitis B vaccine
OLGUNER ÇAĞAL
- Rekombinant hepatit B aşı uygulamasına yanıtların prospektif değerlendirilmesi
Başlık çevirisi yok
M. MUZAFFER TURUNÇ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1994
Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik MikrobiyolojiGataKlinik Mikrobiyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları Ana Bilim Dalı
- Rekombinant insan insülininin oral multipl emülsiyon formülasyonunun geliştirilmesi üzerinde çalışmalar
Studies on the development of oral multiple emulsion formulations of recombinant human insulin
HOCAMURAT HUDAYBERDİYEV
- Rekombinant hepatit B yüzey antijeninin immunoadjuvan taşıyıcılar kullanarak aşı formülasyonlarının hazırlanması üzerinde çalışmalar
Studies on preparation of vaccine formulations using recombinant hepatitis B surface antigens with immunoadjuvant vehicles
AYDAN ERATALAY (DEMİRSAN)
Yüksek Lisans
Türkçe
1998
Eczacılık ve FarmakolojiHacettepe ÜniversitesiFarmasötik Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FİLİZ ÖNER