Hypocrea jecorina QM9414'den pullulanazın saflaştırılması
Purification of pullulanase from Hypocrea jecorina QM9414
- Tez No: 312187
- Danışmanlar: DOÇ. DR. AYŞEGÜL PEKSEL
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Kimya, Biochemistry, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2012
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Yıldız Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 131
Özet
Bu çalışmada Viyana Teknik Üniversitesi, Biyokimyasal Teknoloji ve Mikrobiyoloji Enstitüsü'nden temin edilen Hypocrea jecorina QM 9414'de ilk defa pullulanaz indüksiyonu gerçekleştirildi. Enzim indüksiyonu için optimum şartlar tayin edildi. Bu mikroorganizmadan pullulanaz [EC 3.2.1.41] ilk kez saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimin bazı özellikleri incelendi.Pullulanaz, H. jecorina QM 9414'den homojenizasyon, amonyum sülfat çöktürmesi, DEAE-selüloz ve Sefadeks G-100 kolon kromatografisi yöntemleriyle 11 kat saflaştırıldı. Saflaştırma işlemi süresince sıcaklık +4ºC'de tutuldu. Protein miktar tayini Bradford ve Warburg-Christian yöntemlerine göre; enzim aktivitesi ise 37ºC'de Miller'in yöntemine göre, 540 nm dalga boyunda spektrofotometrede tayin edildi.H. jecorina pullulanazının PAGE sonucunda 130,56 kDa mol ağırlığına karşılık gelen tek aktivite bandı gösterdiği saptandı. SDS-PAGE sonucunda ise bu enzimin monomer yapıda olduğu bulundu. Enzimin optimum sıcaklığı 35?C-65?C arasında belirlendi. Hypocrea jecorina pullulanazının optimum pH'sı substrata göre değişiklik gösterdi. Optimum pH, amilopektin ve pullulan için 6,5, nişasta için 5,0 olarak bulundu. Enzim tarafından katalizlenen reaksiyonun aktivasyon enerjisi 0,6178 kcal.mol-1 olarak hesaplandı. Enzimin amilopektin, nişasta ve pullulan substratlarına karşı Km değerleri sırasıyla 10,7 mg/ml, 15,5 mg/ml ve 38,4 mg/ml; Vmax değerleri ise sırasıyla 3,3145 ?A/dk, 3,3211 ?A/dk ve 3,818 ?A/dk olarak bulundu.
Özet (Çeviri)
In this study, pullulanase induction was realized for the first time at Hypocrea jecorina QM 9414 obtaining from Vienna University of Technology, In(stitute of Chemical Engineering, Division Gene Technology and Applied Biochemistry. The optimum conditions were determined for the enzyme induction. Pullulanase [EC 3.2.1.41] was purified for the first time from this microorganism. Some properties of the purified enzyme were investigated.Pullulanase was purified 11 fold from Hypocrea jecorina QM 9414 by the methods of homogenization, ammonium sulfate precipitation, DEAE cellulose and Sephadex G-100 column chromatography. Temperature of +4 °C was maintained during the purification process. The protein content was determined according to the methods of Bradford and Warburg-Christian and the enzyme activity was measured spectrophotometrically at 37 °C according to the method of Miller at 540 nm.The PAGE of the purified enzyme showed one activity band corresponding to 130,56 kDa molecular weight. SDS-PAGE showed that the enzyme was an monomer composed. The optimum temperature of enzyme was determined between at 35?C-65°C. The optimum pH of Hypocrea jecorina pullulanase was changed according to substrate. The optimum pH was found at 6.5 for amylopectin or pullulan; at 5.0 for starch. The activation energy of the reaction catalyzed by the enzyme was calculated as 0.6178 kcal.mol-1. The affinity of the enzyme against the amylopectin, starch and pullulan was investigated. Km values were for amylopectin, starch and pullulan 10.7 mg/ml, 15.5 mg/ml ve 38.4 mg/ml, respectively. Vmax values were for amylopectin, starch, and pullulan 3.3145 ?A/min, 3.3211 ?A/min ve 3.818 ?A/min, respectively.
Benzer Tezler
- Hypocrea jecorina qm9414 kültürlerinde beta galaktozidazın karakterizasyonu ve kısmi saflaştırılması.
Characterization and partial purification of hypocrea jecorina qm9414 beta galactosidase.
NİLAY ALTAŞ KIYMAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2007
BiyokimyaYıldız Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. AYŞEGÜL PEKSEL
- Hypocrea Jecorina saf kültüründen glutamat oksidaz enziminin üretimi
Glutamate oxidase enzyme production from Hypocrea Jecorina pure culture
FATİH MEHMET EYNUR
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
BiyokimyaYıldız Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EMİNE KARAKUŞ
- Hypocrea jecorina saf kültürü ve Trichoderma reesei 1A mutant suşundan glutaminaz enziminin üretimi
Glutaminase enzyme production from Hypocrea jecorina pure culture and Trichoderma reesei 1A mutant strain
DİLARA BÜLBÜL
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
BiyokimyaYıldız Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EMİNE KARAKUŞ
- Çeşitli mantarlarda polifenol oksidaz indüksiyonunun incelenmesi
Investigation of induction of polyphenol oxidase of various fungi
SEMRA SEKME
- Pullulanazın farklı taşıyıcılarda immobilizasyonu ve bazı özelliklerinin incelenmesi
Immobilization of pullulanase on different carriers and investigation of some properties
CANDA ULUTÜRK
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
BiyokimyaYıldız Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYŞEGÜL PEKSEL