Plazmada D vitamini metabolitlerinin tayini için sıvı kromatografisi-ardışık kütle spektrometresi ile yöntem geliştirilmesi ve validasyonu
Development and validation of liquid chromatography-sequence mass spectrometry for determination of vitamin D metabolites in plasma
- Tez No: 576504
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ DENİZ ÇIKLA YILMAZ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Marmara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 69
Özet
İnsan vücudunda D vitamini deposunu 25(OH)D gösterir ve 25(OH)D, 25(OH)D3 ve 25(OH)D2 metabolitlerinin toplamı olarak belirtilir. D vitamini ölçümünde yaygın bir şekilde kullanılmakta olan otomatik immünonassay analiz yöntemi D vitamini miktarını gerçek değerinden daha fazla ölçmektedir ve 25(OH)D3 ile 25(OH)D2 metabolitlerinin miktarlarını ayrı ayrı verememektedir. Yüksek hassasiyet ve seçiciliğe, geniş ölçüm aralığına sahip olan LC-MS/MS yöntemi klinik laboratuvarlarda yakın gelecekte yerini alacaktır. Bu sebeble çalışmamızda plazmadaki D vitamini metaboliti olan 25(OH)D3 ile 25(OH)D2'nin miktarının tayini için LC-MS/MS yöntemiyle pratik metot geliştirilip valide edilmesi amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem:. İlk olarak yedi farklı (A, B, C, D, E, F, G) örnek hazırlama metodu farklı çöktürme metotları uygulanarak en uygun örnek hazırlama metodu seçildi. Geliştirdiğimiz yöntemde Waters XEVO TQD LC-MS/MS cihazı, kolon olarak ACQUITY C18 (1,8 μm, 2,1 x 100 mm) mobil faz olarak 5 mM amonyum format ve formik asitli (MF-A1) tampon çözeltisi, 5 mM metanol içerisinde amonyum format ve formik asitli (MF-B1) çözelti gradient sistem ile 0,4 mL/dk akış hızında çalışıldı. Bulgular: Geliştirdiğimiz yöntemde alıkonma zamanı 25(OH)D3 için 1,02 dakika, 25(OH)D2 1,06 dakika ve iç standart 25(OH)D3-d6 için 1,01 dakika bulunmuştur. Sonuçlar: Geliştirilen yöntemi geçerli kılmak için; %CV, %GK, S\N, LOQ alan, alıkonma zamanı, kalibrasyon eğrisi performansı, kesinlik, doğruluk, stabilite parametreleri ve matriks etkilerine bakılmıştır. Yöntem 25(OH)D2 ve 25(OH)D3 için 5,00 – 150,00 ng/mL aralıklarında doğrusal bulunmuştur.
Özet (Çeviri)
Vitamin D status of human body is indicated as 25 (OH) D which is the sum of the 25 (OH) D3 and 25 (OH) D2 metabolites. The widely used automatic immunonassay analysis method, measures the amount of vitamin D more than its actual value and is not able to give the amounts of metabolites separately. LC-MS / MS method allows high sensitivity and selectivity, wide measurement range, and simultaneous determination of metabolites, will be replaced by automated immunonassay methods in the near future in clinical laboratories. Therefore, in our study, it is aimed to develop and validate a simple and fast LC-MS / MS method for the quantitative determination of vtamin D metabolites in plasma. Materials and Methods: Seven different (A, B, C, D, E, F, G) sample preparation method tests were performed on ACQUITY C18 (1.8 μm, 2.1 x 100 mm) column. Mobile phase was 5.00 mM ammonium formate (MF-A1) and formic acid buffer solution, 5.00 mM ammonium formate (MF-B1) and formic acid in methanol solution. Gradient pump system with a flow rate of 0.4 mL/min.was used. Sequential Mass spectrometry analyzes were performed using Waters XEVO TQD LC-MS / MS as an instrument. Results: The retention time was 1.02 minutes for 25 (OH) D3, 25 (OH) D2 for 1.06 minutes and 1.01 minutes for internal standard 25 (OH) D3-d6. Conclusion: % CV, % Recovery S\N, LOQ area, retention time, calibration curve performance, accuracy, accuracy, stability parameters and matrix effects were examined for method validation. Method 25 (OH) D2 and 25 (OH) D3 were linear for the range of 5.00 to 150.00 ng / mL.
Benzer Tezler
- Türk toplumunda vitamin D bağlayıcı protein genotipi ve plazma 25(OH)D konsantrasyonu ile ilişkisi
The relationship between the genotype of vitamin D binding protein and plasma 25(OH)D concentration in Turkish population
LUTFİYE KARCIOĞLU BATUR
Doktora
Türkçe
2019
Tıbbi Biyolojiİstanbul Üniversitesi-CerrahpaşaTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AHMET ÖZAYDIN
PROF. DR. NEZİH HEKİM
- Hiperhomosisteinemide metiyonin ve ilgili metabolitlerinin incelenmesi
Analysis of methionine and related metabolites in hyperhomocysteinemia
NURCAN KILIÇ BAYGUTALP
Doktora
Türkçe
2012
BiyokimyaAtatürk ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EBUBEKİR BAKAN
- Tip 2 diabetes mellitus tanılı hastalarda mikrovasküler komplikasyonlar ile plazma vitamin d düzeyi arasındaki ilişki
Başlık çevirisi yok
HANDE ERMAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2014
İç HastalıklarıSağlık Bakanlığıİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
UZMAN BANU BÖYÜK
- Uzamış sarılık ile başvuran term yenidoğanlarda uzamış sarılık etiyolojisinde D vitamini düşüklüğünün yerininin gösterilmesi
Vi̇tami̇n D defi̇ci̇ency i̇n newborns wi̇th prolonged jaundi̇ce
OSMAN NURİ ÖZEN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2021
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıKahramanmaraş Sütçü İmam ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SADIK YURTTUTAN
- Tip 2 diyabetiklerde, vitamin D reseptörgeni fokı (rs10735810) polimorfizminin, serum 25 OH D vitamin düzeyleri ve 24 saatlik kan basıncı izlemi parametreleriyle ilişkisi
The relationship of vitamin D receptor gene foki(rs10735810) polymorphism with serum 25 OH vitamin d levels and 24 hour blood pressure monitoring parameters in type 2 diabetics
İNCİ CAZKER
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2023
İç HastalıklarıTrakya Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ AYTEN ÜSTÜNDAĞ