Geri Dön

Production of ToqI endonuclease from geneticolly engineered E.col/BL21(DE3) [pEToq(R+M)]

Genetik olarak dzayn edilmiş e.coli BL21(DE3) [pEToq(R+M)]'den ToqI endonucleaz üretimi

  1. Tez No: 95476
  2. Yazar: OSMAN EKSİK
  3. Danışmanlar: PROF. BETÜL KIRDAR
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Kimya Mühendisliği, Chemical Engineering
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2000
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 82

Özet

ÖZET GENETİK OLARAK DİZAYN EDİLMİŞ E. coli BL21(DE3)[pETaq(R+M)]'den Taql ENDONÜKLEAZ ÜRETİMİ Thermus aquaticus 'dan izole edilmiş bir II. tip restriksiyon endonükleazı olan Taql restriksiyon endonükleazı, DNA üzerinde spesifik 5' TCGA 3' bölgelerini tanır ve keser. Taql Thermus aquaticus' fan. izalosynu, enzim kaybı ve yüksek üretim maliyeti gibi teknik zorluklara yol açtığından bunların giderilmesi için Taql endonükleazı kodlayan gen E. coli BL21(DE3)'eklonlandı. Bu çalışmanın ilk bölümünde, T7 promoter' ı kontrolü altında bulunan Taql endonükleazı ve tetracycline promoter' ı kontrolü altında bulunan Taql metilaz genini bir arada içeren yeni bir rekombinant plasmid oluşturuldu. Taql metilaz geni tetracycline promoter' ı ile birlikte pMETaq plasmidinden PshAl ve Sspl restriksiyon endonükleazlanyla kesilip, Taql endonükleazı kodlayan pETaqR plasmidinin PshAlI Fspl bölgesine klonlandı. îkinci bölümde, elde edilen plasmid elektroporasyon tekniği kullanilarak E. coli hücrelerine aktarıldı. PETaq(R+M) recombinant plasmidini içeren 5 numaralı koloninin Taql metilaz ve Taql restriksiyon endonükleaz aktivitesi gösterdiği belirlendi. Hücreler eksponensiyal büyüme fazımn ortasında indüklendikten dört saat sonra, Taql restriksiyon endonükleaz aktivitesinin maksimum (210 106 U/L) değerine ulaştığı bulundu. Rekombinant hücrelerin ve konak hücrelerin büyüme özellikleri belirlendi. Recombinant E. coli BL21(DE3)[pETaq(R+M] iyi ve yüksek düzeyde Taql restriksiyon enzimi ürettikleri saptandı.

Özet (Çeviri)

IV ABSTRACT PRODUCTION OF Taql ENDONUCLEASE FROM GENETICALLY ENGINEERED E. coli BL21(DE3)[ pETaq(R+M) ] Taql restriction endonuclease, which is a type II restriction endonuclease, isolated from Thermits aquaticus can cleave DNA at specific sites 5' TCGA 3'. Since the isolation of this enzyme from Thermus aquaticus presents technical difficulties associated with high production cost, the gene encoding Taql restriction endonuclease has been cloned into E. coli cells. In the first part of this study, a new recombinant plasmid which carries both Taql endonuclease and methylase genes under the control of the T7 and tetracycline promoters, respectively, was constructed. Taql methylase gene, together with the tetracycline promoter region was cut from pMETaq plasmid using PshAl and Sspl restriction endonucleases and subcloned into PshAl/ Fspl region of the pETaqR encoding Taql restriction endonuclease. In the second part, plasmid construction was transferred into E. coli BL21(DE3) cells by electroporation technique. One colony (colony #5) was identified as recombinant E. coli cells which is harbouring pETaq(R+M) plasmid was shown to display both Taql methylase and Taql restriction endonuclease activities. The maximum total Taql endonuclease activity (210 106 U/L) could be reached when the recombinant cells were induced at the middle exponential phase.for four hours. The growth characteristics of these recombinant cells and the host cells were also determined. The recombinant E. coli BL21(DE3) [pETaq(R+M)] cells were found to be a good overproducer of Taql restriction endonuclease.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    412409

    Giysi tasarımında estetik kavramına yenilikçi ve deneysel yaklaşımlar

    Innovative and experimental approaches to the concept of esthetic

    VAHİDE MELDA ÜNAL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Giyim EndüstrisiHaliç Üniversitesi

    Tekstil ve Moda Tasarımı Ana Sanat Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ŞÖHRET AKTEPE

  2. Tez No

    413543

    Palm bazlı kakao yağı ikamesi yağ ürünleri üretimi

    Production of palm based cocoa butter like fats

    ABDULLAH AYGÖREN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Gıda MühendisliğiÇukurova Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. TÜRKAN KEÇELİ MUTLU

  3. Tez No

    414211

    Çeşitli nano yapıların sentezi ve karakterizasyonu

    Production of various nano particles and their characterization

    GÜNCEM ÖZGÜN EREN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Metalurji MühendisliğiYıldız Teknik Üniversitesi

    Metalurji ve Malzeme Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FİGEN KAYA

  4. Tez No

    414308

    Metal matrisli kompozitlerin direkt geri kazanım tozlarından T/M yöntemi ile üretimi ve mekanik özelliklerinin incelenmesi

    Production of metal matrix composites (MMCS) by P/M method from direct recycled powders and investigation of mechanical properties of MMCS

    RECEP ONUR UZUN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Makine MühendisliğiCelal Bayar Üniversitesi

    Makine Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HÜLYA DURMUŞ

  5. Tez No

    415195

    Badem kabuğu ve çam fıstığı kabuğundan kimyasal yöntem ile aktif karbon üretimi ve karakterizasyonu

    Production of activated carbon by chemical method from almond and pine nut shells and its characterization

    MEHMET ŞEHMUZ ÇETİNKAYA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    KimyaKahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi

    Orman Endüstri Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET HAKKI ALMA

Geri Dön