Geri Dön

Production of ToqI endonuclease from geneticolly engineered E.col/BL21(DE3) [pEToq(R+M)]

Genetik olarak dzayn edilmiş e.coli BL21(DE3) [pEToq(R+M)]'den ToqI endonucleaz üretimi

  1. Tez No: 95476
  2. Yazar: OSMAN EKSİK
  3. Danışmanlar: PROF. BETÜL KIRDAR
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Kimya Mühendisliği, Chemical Engineering
  6. Anahtar Kelimeler: DNA, Endonükleaz, Proteinler, Thermus aquaticus, DNA, Endonuclease, Proteins, Thermus aquaticus
  7. Yıl: 2000
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

ÖZET GENETİK OLARAK DİZAYN EDİLMİŞ E. coli BL21(DE3)[pETaq(R+M)]'den Taql ENDONÜKLEAZ ÜRETİMİ Thermus aquaticus 'dan izole edilmiş bir II. tip restriksiyon endonükleazı olan Taql restriksiyon endonükleazı, DNA üzerinde spesifik 5' TCGA 3' bölgelerini tanır ve keser. Taql Thermus aquaticus' fan. izalosynu, enzim kaybı ve yüksek üretim maliyeti gibi teknik zorluklara yol açtığından bunların giderilmesi için Taql endonükleazı kodlayan gen E. coli BL21(DE3)'eklonlandı. Bu çalışmanın ilk bölümünde, T7 promoter' ı kontrolü altında bulunan Taql endonükleazı ve tetracycline promoter' ı kontrolü altında bulunan Taql metilaz genini bir arada içeren yeni bir rekombinant plasmid oluşturuldu. Taql metilaz geni tetracycline promoter' ı ile birlikte pMETaq plasmidinden PshAl ve Sspl restriksiyon endonükleazlanyla kesilip, Taql endonükleazı kodlayan pETaqR plasmidinin PshAlI Fspl bölgesine klonlandı. îkinci bölümde, elde edilen plasmid elektroporasyon tekniği kullanilarak E. coli hücrelerine aktarıldı. PETaq(R+M) recombinant plasmidini içeren 5 numaralı koloninin Taql metilaz ve Taql restriksiyon endonükleaz aktivitesi gösterdiği belirlendi. Hücreler eksponensiyal büyüme fazımn ortasında indüklendikten dört saat sonra, Taql restriksiyon endonükleaz aktivitesinin maksimum (210 106 U/L) değerine ulaştığı bulundu. Rekombinant hücrelerin ve konak hücrelerin büyüme özellikleri belirlendi. Recombinant E. coli BL21(DE3)[pETaq(R+M] iyi ve yüksek düzeyde Taql restriksiyon enzimi ürettikleri saptandı.

Özet (Çeviri)

IV ABSTRACT PRODUCTION OF Taql ENDONUCLEASE FROM GENETICALLY ENGINEERED E. coli BL21(DE3)[ pETaq(R+M) ] Taql restriction endonuclease, which is a type II restriction endonuclease, isolated from Thermits aquaticus can cleave DNA at specific sites 5' TCGA 3'. Since the isolation of this enzyme from Thermus aquaticus presents technical difficulties associated with high production cost, the gene encoding Taql restriction endonuclease has been cloned into E. coli cells. In the first part of this study, a new recombinant plasmid which carries both Taql endonuclease and methylase genes under the control of the T7 and tetracycline promoters, respectively, was constructed. Taql methylase gene, together with the tetracycline promoter region was cut from pMETaq plasmid using PshAl and Sspl restriction endonucleases and subcloned into PshAl/ Fspl region of the pETaqR encoding Taql restriction endonuclease. In the second part, plasmid construction was transferred into E. coli BL21(DE3) cells by electroporation technique. One colony (colony #5) was identified as recombinant E. coli cells which is harbouring pETaq(R+M) plasmid was shown to display both Taql methylase and Taql restriction endonuclease activities. The maximum total Taql endonuclease activity (210 106 U/L) could be reached when the recombinant cells were induced at the middle exponential phase.for four hours. The growth characteristics of these recombinant cells and the host cells were also determined. The recombinant E. coli BL21(DE3) [pETaq(R+M)] cells were found to be a good overproducer of Taql restriction endonuclease.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    771988

    Investigating risk assessment and role of safety concerns in autonomous vehicle

    Otonom araçlarda risk değerlendirmesi ve güvenlik kaygılarının modellenmesi

    GÖZDE BAKİOĞLU DOĞANYILMAZ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    Ulaşımİstanbul Teknik Üniversitesi

    İnşaat Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ALİ OSMAN ATAHAN

  2. Tez No

    1010315

    Molecular characterization of an antimycin a-resistant saccharomyces cerevisiae strain obtained by inverse metabolic engineering

    Tersine metabolik mühendislik ile elde edilmiş antimisin a-dirençli saccharomyces cerevisiae suşunun moleküler karakterizasyonu

    ALİCAN TOPALOĞLU

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2026

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)

    PROF. DR. ZEYNEP PETEK ÇAKAR

    DOÇ. DR. CECILIA GEIJER

  3. Tez No

    843845

    Fiber takviyeli epoksi matris kompozitlerin kalite indeksinin türetilmesi ve karakterizasyonu

    Derivation and characterization of quality index of epoxy matrix composites reinforced by fiber

    MEHMET GÜÇLÜ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Makine Mühendisliğiİstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa

    Makine Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MAHMUT CÜNEYT FETVACI

  4. Tez No

    98494

    Alüminyum alaşımlarının soğuk haddelemesinde yük hesabı metodlarının karşılaştırılması

    A Comparision of loading estimation of aluminium alloys in cold rolling

    HAKAN BAYKAL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    Metalurji Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    PROF.DR. E. SABRİ KAYALI

  5. Tez No

    194535

    Adenoid doku CD23 (FCe;RII) ekspresyonunun çocuklarda sık tekrarlayan üst solunum yolu yakınmaları ve allerji yönünden değerlendirilmesi

    CD23 expression in adenoid tissue assesment of children with recurrent upper tract infection and allergy

    DEMET EĞLENOĞLU ALAYGUT

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıDokuz Eylül Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. ÖZDEN ANAL

Geri Dön