Geri Dön

Production of ToqI endonuclease from geneticolly engineered E.col/BL21(DE3) [pEToq(R+M)]

Genetik olarak dzayn edilmiş e.coli BL21(DE3) [pEToq(R+M)]'den ToqI endonucleaz üretimi

  1. Tez No: 95476
  2. Yazar: OSMAN EKSİK
  3. Danışmanlar: PROF. BETÜL KIRDAR
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Kimya Mühendisliği, Chemical Engineering
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2000
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 82

Özet

ÖZET GENETİK OLARAK DİZAYN EDİLMİŞ E. coli BL21(DE3)[pETaq(R+M)]'den Taql ENDONÜKLEAZ ÜRETİMİ Thermus aquaticus 'dan izole edilmiş bir II. tip restriksiyon endonükleazı olan Taql restriksiyon endonükleazı, DNA üzerinde spesifik 5' TCGA 3' bölgelerini tanır ve keser. Taql Thermus aquaticus' fan. izalosynu, enzim kaybı ve yüksek üretim maliyeti gibi teknik zorluklara yol açtığından bunların giderilmesi için Taql endonükleazı kodlayan gen E. coli BL21(DE3)'eklonlandı. Bu çalışmanın ilk bölümünde, T7 promoter' ı kontrolü altında bulunan Taql endonükleazı ve tetracycline promoter' ı kontrolü altında bulunan Taql metilaz genini bir arada içeren yeni bir rekombinant plasmid oluşturuldu. Taql metilaz geni tetracycline promoter' ı ile birlikte pMETaq plasmidinden PshAl ve Sspl restriksiyon endonükleazlanyla kesilip, Taql endonükleazı kodlayan pETaqR plasmidinin PshAlI Fspl bölgesine klonlandı. îkinci bölümde, elde edilen plasmid elektroporasyon tekniği kullanilarak E. coli hücrelerine aktarıldı. PETaq(R+M) recombinant plasmidini içeren 5 numaralı koloninin Taql metilaz ve Taql restriksiyon endonükleaz aktivitesi gösterdiği belirlendi. Hücreler eksponensiyal büyüme fazımn ortasında indüklendikten dört saat sonra, Taql restriksiyon endonükleaz aktivitesinin maksimum (210 106 U/L) değerine ulaştığı bulundu. Rekombinant hücrelerin ve konak hücrelerin büyüme özellikleri belirlendi. Recombinant E. coli BL21(DE3)[pETaq(R+M] iyi ve yüksek düzeyde Taql restriksiyon enzimi ürettikleri saptandı.

Özet (Çeviri)

IV ABSTRACT PRODUCTION OF Taql ENDONUCLEASE FROM GENETICALLY ENGINEERED E. coli BL21(DE3)[ pETaq(R+M) ] Taql restriction endonuclease, which is a type II restriction endonuclease, isolated from Thermits aquaticus can cleave DNA at specific sites 5' TCGA 3'. Since the isolation of this enzyme from Thermus aquaticus presents technical difficulties associated with high production cost, the gene encoding Taql restriction endonuclease has been cloned into E. coli cells. In the first part of this study, a new recombinant plasmid which carries both Taql endonuclease and methylase genes under the control of the T7 and tetracycline promoters, respectively, was constructed. Taql methylase gene, together with the tetracycline promoter region was cut from pMETaq plasmid using PshAl and Sspl restriction endonucleases and subcloned into PshAl/ Fspl region of the pETaqR encoding Taql restriction endonuclease. In the second part, plasmid construction was transferred into E. coli BL21(DE3) cells by electroporation technique. One colony (colony #5) was identified as recombinant E. coli cells which is harbouring pETaq(R+M) plasmid was shown to display both Taql methylase and Taql restriction endonuclease activities. The maximum total Taql endonuclease activity (210 106 U/L) could be reached when the recombinant cells were induced at the middle exponential phase.for four hours. The growth characteristics of these recombinant cells and the host cells were also determined. The recombinant E. coli BL21(DE3) [pETaq(R+M)] cells were found to be a good overproducer of Taql restriction endonuclease.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    80919

    Alfa-1 proteaz inhibitorlerine yönelik antikor üretimi ve iki farklı immünoassay ortamında alfa-1 proteaz inhibitörünün düzeyinin belirlenmesinde kullanımı

    Production of antibody against alpha-1 proteinose inhibitor and using for determination level of alpha-1 proteinose inhibitor in two different immunoassay medium

    OYA ORTAPAMUK ÖZDEMİR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    BiyokimyaHacettepe Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NİLGÜN SÜMER

  2. Tez No

    82265

    Afyon yöresi harman tuğlacılığı ve bu yöntemin sanatsal alanda kullanımı

    Production of field brickiu Afyon region and using of this method at fiue arts area

    ABİDİN ÖZDEMİR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    Güzel SanatlarMarmara Üniversitesi

    Seramik ve Cam Ana Sanat Dalı

    PROF. DR. GÜNGÖR GÜNER

  3. Tez No

    82522

    Production of microtubers in potato (Solanum tuberosum l.)

    Patateste mikrotüber üretimi (Solanum tu berosum l.)

    SEVGİ BEYAZOVA

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1999

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HÜSEYİN AVNİ ÖKTEM

  4. Tez No

    82558

    Production of Cu-based shape memory alloys by powder metallurgy

    Bakır esaslı şekil bellekli alaşımların toz metalurjisi yöntemiyle üretimi

    ARCAN FEHMİ DERİCİOĞLU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1999

    Metalurji MühendisliğiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Metalurji ve Malzeme Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BİLGEHAN ÖGEL

  5. Tez No

    83203

    Al2O3 partikül takviyeli Al-Cu esaslı metal matriksli kompozit malzeme üretimi

    Production of Al2O3 particle reinforced Al-Cu based metal matrix composite material

    ÜMİT GENCAY BAŞCI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    Metalurji Mühendisliğiİstanbul Üniversitesi

    Metalurji Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İBRAHİM YUSUFOĞLU

Geri Dön